. Efecto del bloqueo de la proteína xShroom1 sobre la corriente del canal CFTR en ovocitos de Xenopus laevis

PALMA A, MARINO G, GALIZIA L, KOTSIAS BA

Congreso; Congreso Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

El canal de cloruro CFTR y el canal de sodio ENaC se localizan en la membrana apical de epitelios y se sabe que existe una regulación entre ambos. xShroom1 es una proteína que se encuentra constitutivamente expresada en ovocitos de Xenopus laevis. Previamente demostramos que esta proteína regula el canal ENaC, modificando el número de canales insertos en la membrana. El objetivo del presente trabajo es estudiar si además existe una relación entre xShroom1 y CFTR, ya que de ser así esta proteína podría estar implicada en la regulación entre ambos canales. Los experimentos fueron realizados utilizando la técnica de voltaje clamp en ovocitos de Xenopus laevis. Detectamos corrientes estimuladas por AMPc (forskolina + IBMX) en ovocitos inyectados con CFTR (-0.4 ± 0.14 uA, n=13), las cuales no fueron observadas en ovocitos inyectados con agua (-3.84x10-4 ± 0.002 uA, n=8, p<0.05). Estas corrientes fueron bloqueadas con el inhibidor de canales de cloruro DPC (1mM). Luego evaluamos las corrientes de CFTR cuando la proteína xShroom1 es bloqueada. En ovocitos coinyectados con CFTR y una secuencia antisense de xShroom1 las corrientes fueron mayores (-0.95 ± 0.52 uA, n=8) que en ovocitos inyectados con CFTR y una secuencia sense de la proteína (-0.19 ± 0.12 uA, n=10, p<0.01). Posteriormente determinamos la vida media del canal en la membrana plasmática midiendo la tasa de decaimiento de la corriente de cloruro como función del tiempo, luego de incubar los ovocitos con brefeldina A (inhibidor del transporte de proteínas a la membrana). El bloqueo de xShroom1 incrementó la vida media del canal en la membrana de 1.02 ± hs a 8.66 ± hs (n=3, p). A partir de estos resultados podemos concluir que existe una relación entre CFTR y xShroom1. Además el bloqueo de xShroom1 produjo un aumento en la vida media del CFTR, indicando que el incremento observado en la corriente de cloruro no seria por un mayor transporte del canal a la membrana, sino que podría deberse a una reducción en la endocitosis del canal o a una disminución en la degradación del mismo por el proteasoma.