INVESTIGADORES
VENTURINO Andres
congresos y reuniones científicas
Título:
Modulación por poliaminas de la actividad in vitro de acetilcolinesterasa de anguila. Aplicación de modelos cinéticos sobre el mecanismo de acción
Autor/es:
VENTURINO A; ROSENBAUM E; BERGOC R.M.; PECHEN DE D'ANGELO A.M
Lugar:
Huerta Grande
Reunión:
Congreso; XXVII Reunión Anual de la SAIB; 1991
Institución organizadora:
SAIB
Resumen:
La
Acetilcolinesterasa (AChE) es una enzima cuyo
mecanismo de acción ha sido ampliamente estudiado~ habiéndose encontrado sitios
regulatorios para cationes del tipo amonio 4rio. Kossorotow et al~ han propuesto un rol regulatorio para
las poliaminas (PAs) in vivo a partir de estudios cinéticos sobre AChE
de eritrocito (Biochem.J.144:21-27(1974}}. Hemos observado que las PAs aceleran
la hidrólisis espontánea del sustrato acetiltiocolina (ATC)~ por lo cual
estudiamos el efecto de espermina (Spm} sobre la AChE prestando particular
atención a esta acción. A partir del ajuste de los datos por regresión no
lineal hemos testeado modelos cinéticos que consideran también la inhibición
por sus trato típica que presenta esta enzima. La actividad de AChE se
determinó por el método de Ellman.
La interacción de Spm y ATC en
ausencia de enzima acelera 140 veces la hidrólisis espontánea de ATC. Hemos
constatado que la Spm
modula la actividad de AChE en forma dual, inhibiendo/activando a bajas/ altas
concentraciones de sustrato. Los modelos que presentaron mejor ajuste de datos
justifican: a)Un aumento en la Vm
app por Spm debido al incremento de kcat (2X) más que a la pérdida de afinidad
del sustrato por el sitio inhibitorio (3X) ya que ésta es mayor para el
cata11tico (12X)= b)La inhibición de AChE por Spm a bajo sustrato a través de
la disminución de la afinidad por el sitio catalítico. Alternativamente, el
considerar al complejo SpmATC como sustrato sugiere que su afinidad por AChE
es mucho mayor que ATC. Sin embargo la
Kd obtenida para la formación de este complejo (~ 300 mM), no permite sacar
conclusiones definitivas.