INVESTIGADORES
TRINKS Julieta
congresos y reuniones científicas
Título:
Infección oculta por Virus Hepatitis B (HBV) en hemodonantes: detección y caracterización genómica parcial.
Autor/es:
TRINKS J; GAMBINO G; TOLEDANO A; BOBILLO MC; FERNÁNDEZ TOSCANO M; CUESTAS ML; MINASSIAN ML; RIVERO CW; CORACH D; MATHET VL; REY J; OUBIÑA JR
Lugar:
Buenos Aires.
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología.; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología.
Resumen:
INTRODUCCIÓN:
La infección oculta por HBV se caracteriza por la detección de ADN viral en
suero o hígado de individuos en quienes no se detecta HBsAg más allá del
período de ventana de la infección, con o sin marcadores serológicos de
infección previa. En la ciudad de Buenos Aires y alrededores, un estudio previo
reportó una prevalencia de infección oculta por HBV del 7,7 % entre usuarios de
drogas inyectables, desconociéndose aún dicha tasa entre hemodonantes (Trinks y
cols., J. Viral Hepatitis, 2008).
OBJETIVO: Documentar la eventual presencia de ADN del HBV en donantes con
niveles detectables de Igs totales anti-HBc , como único marcador de infección.
INDIVIDUOS, MATERIALES Y MÉTODOS: Se recolectó el suero de 110 muestras de
sangre de dadores que concurrieron al servicio de Hemoterapia del Hospital de
Clínicas José de San Martín entre Mayo de 2006 y Marzo de 2008 que exhibían
positividad para Igs totales anti-HBc y resultados negativos para HBsAg,
anticuerpos anti-HCV y anti-HIV. Cada una de las muestras fue procesada
individualmente mediante un triple test de amplificación de ácidos nucleicos
para la detección cualitativa y simultánea en suero o plasma humano, del RNA
del HIV-1, el RNA del HCV y el DNA del HBV (PROCLEIX-ULTRIO) según las instrucciones
del fabricante. Las muestras con
resultados reactivos en el Ensayo Ultrio, fueron analizadas individualmente con
el Procleix Ultrio® HBV Discriminatory Assay (Ensayo Discriminatorio) para determinar si eran reactivas para HBV. A
su vez, en aquellas muestras positivas, se procedió a la extracción de ADN
mediante lisis alcalina. Se realizaron también varios ensayos no comerciales de
amplificación utilizando diferentes pares de cebadores específicos para todas
las regiones genómicas del HBV (PCR para gen S, y PCRs anidadas para una región
parcialmente yuxtapuesta a la anterior, región pre-core/core y para el genoma
completo). Los productos amplificados fueron visualizados en geles de agarosa
al 1%, teñidos con bromuro de etidio, y purificados para su posterior
secuenciación nucleotídica (Big-Dye Termination chemistry, Applied
Biosystems, USA ). RESULTADOS: Tres de las 110 muestras séricas analizadas
(2,7%) fueron positivas para el triple test PROCLEIX-ULTRIO. Sin embargo, sólo
dos de ellas exhibieron reactividad en el ensayo discriminatorio indicando la
presencia de ADN del HBV (1,8%). El ADN de estas dos muestras (extraído en
paralelo) fue también amplificado mediante PCR anidada, observándose bandas del
tamaño esperado para las regiones genómicas del HBV comprendidas entre las
posiciones 1736 a 2471. El análisis filogenético de la secuencia nucleotídica
de la región Pre-core/core de una de las muestras reveló que ésta pertenece al
genotipo E, oriundo de África y excepcional en América. Se encuentra en procesamiento la
caracterización genómica de la segunda muestra positiva en el test
discriminatorio para HBV. CONCLUSIONES: 1. Se documentó la presencia de
infección oculta por HBV entre hemodonantes
con anticuerpos anti-HBc (1,8% de la población estudiada). 2. Dado
que : i) el genotipo E exhibe la mayor divergencia aminoacídica entre
los genotipos del HBV a nivel del determinante a del HBsAg, -lo cual puede
afectar su detección mediante equipos comerciales que utilizan anticuerpos
monoclonales- ; y ii) la sensibilidad de
la metodología empleada para detectar genomas virales es superior a la del
enzimoinmunoensayo para pesquisar el HBsAg,
este estudio muestra la ventaja de realizar el tamizaje de las
unidades de sangre a transfundir mediante la tecnología NAT (Nucleic acid
Amplification Testing) para
minimizar el riesgo la transmisión de HBV por esta vía.