INVESTIGADORES
IRAZUSTA Veronica Patricia
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudios de la Expresión diferencial de Proteínas en levaduras con Capacidad de Biorremediar Cromo
Autor/es:
ANAHI BERNAL; VERÓNICA IRAZUSTA
Reunión:
Jornada; XIV Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores ?Augusto Palavecino"; 2013
Resumen:
INTRODUCCION: En
la naturaleza el cromo (Cr) existe principalmente en su estado Cr(III) y
Cr(VI). El Cr(III) es un elemento esencial, sin embargo el Cr(VI) es siempre
tóxico para los organismos vivos
siendo un agente mutagénico y cancerígeno. La
utilización de métodos biológicos para remediar un ambiente contaminado
(biorremediación) ofrece una alta especificidad en la remoción del metal de
interés y es la más adecuada para la eliminación de metales pesados de áreas
contaminadas. OBJETIVOS: 1) Estudiar
los perfiles proteicos de membranas y proteínas extracelulares de las levaduras Cyberlindnera
jadinii (M9) y Wickerhamomyces
anomalus (M10). 2) Identificar mediante huella peptídica las proteínas
diferencialmente expresadas en la levadura. 3) Determinar el potencial
antioxidante de las células. MATERIALES
Y METODOS: Crecimiento en medio YNB en ausencia (control) y presencia de
0.5 mM Cr(VI), 30°C y 250 rpm, durante 18 hs. Ruptura celular por medios
mecánicos. Para la obtención de extractos ricos en proteínas de membrana se
utilizo el kit comercial ProteoExtract (Calbiochem). Las proteínas extracelulares
se precipitaron con sulfato de amonio. El análisis monodimensional de los
extractos totales de membrana y extracelulares se llevó a cabo mediante electroforesis
SDS-PAGE al 10 % y posterior tinción con Commassie Blue. Las bandas con mayor
expresión, en presencia de cromo, fueron recortadas e identificadas por MALDI
TOF/TOF. La actividad superóxido dismutasa y catalasa fueron medidas por
zimogramas y en espectrofotómetro a 240 nm, respectivamente. RESULTADOS: Los perfiles proteicos de
los extractos totales mostraron cambio en la expresión de proteínas cuando las
cepas de levadura fueron expuestas a 0.5 mM Cr(VI). La fracción de proteínas de
membrana, mostro la sobreexpresión de 10 bandas en la cepa M9 y de 7 bandas en
M10 en presencia del metal. Fueron identificadas 3 bandas de proteínas
secretadas por las levaduras. La actividad antioxidante de ambas cepas de
levaduras se encuentra aumentada en presencia del metal. CONCLUSIONES: Las levaduras Cyberlindnera
jadinii (M9) y Wickerhamomyces
anomalus (M10) con capacidad de biorremediar cromo, presentan una expresión
diferencial de proteínas totales, de membrana y extracelulares en presencia del
metal. Las altas concentraciones de Cr(VI) en el medio de cultivo provoca el
aumento en la actividad de enzimas antioxidantes, demostrando el estrés
oxidativo en dichas células.