REGULACION DE LA EXPRESION DEL GEN DE LA TRH POR AGENTES HIPERTROFICOS EN CULTIVOS DE FIBROBLASTOS CARDIACOS DE RATAS NEONATAS

MARIANO LUIS, SCHUMAN; VANESA COPA; MARIA SILVINA, LANDA; ALVAREZ AZUCENA,; CARLOS JOSE, PIROLA; SILVIA INES, GARCIA

Buenos Aires.

Jornada; VI Jornadas Científicas del Instituto de Investigaciones Medicas A. Lanari, UBA.; 2007

Instituto de Investigaciones Medicas A. Lanari, UBA.

Comenzamos demostrando que el sistema de TRH cardiaco esta hiperactivado en el corazon hipertrofiado de las SHR vs WKY y vs animales SHR de edad prehipertrofica.luego, analizamos la presencia de TRH y su receptor tipo 1 en miocitos y fibroblastos de ratas neonatos describiendo por primera vez la presencia en ambos tipos celulares y mayoritariamente en fibroblastos (casi 5 veces). A partir de estudios que muestran a los fibroblastos cardiacos (FC), no solo como formadores de la matriz sino como capaces de transmitir estimulos directos a miocitos, analizamos si la estimulacion por 24 y 72 hs con agentes hipertrofiantes, capaces de estimular la expresion de TRH en miocitos provocaban efectos a nivel de los FC. Realizamos cultivos de FC de neonatos de ratas macho Wistar, SHR y WKY estimulados con agentes hipertroficos (Fenilefrina (Phe) 1 y 100 uM; Inositol 3P (100 nM (libre de suero - 24hs) y cuantificamos la expresion de TRH , ANPy bMHC mediante RT-real time PCR a partir del RNA total. Los corazones fueron digeridos a 37ºC en PBS y 0,1% de tripsina. Se realizo un gradiente de percoll para separar los FC y resuspendidos en DMEM, 5% FCS, 5% HS.. La Phe provoco un aumento significativo de la expresion M gen de TRH de 4 veces vs el control solo a 100 uM a las 24 y a las 72 hs (p< 0,001) (Anova, tukey test), asimismo el IP3 provoco un aumento tiempo dependiente (C: 100%; IP3-24h: 200%; lP3-48h: 250%, p< 0,03, n= 3).Obtuvimos resultados similares en la expresion del gen de ANP bajo estas mismas condiciones y una correlacion significativa con los niveles de la expresion del gen de TRH (r:0,48 p<0,04). Resultados negativos observamos al analizar el gen de la bMHC en todas las condiciones, lo que habla a favor de una regulacion especifica de ambos genes (ANP y TRH) que diferiria de la observada por estos agentes hipertrofiaos en los miocitos donde tienen efectos positivos sobre todos los genes tempranos marcadores de hipertrofia.Finalmente analizamos la expresion del gen de TRH bajo estos estimulos en FC de neonatos de SHR vs WKY. Sorprendentemente, en celulas de neonatos (donde aun no son evidentes las alteraciones a nivel cardiaco) encontramos un aumento significativo de casi el 70% de la expresion del gen de TRH en el cultivo de SHR en la condicion basal respecto de la WKY. Se observo un aumento muy significativo de la expresion de TRH con Phe que fue dosis y tiempo dependiente solo en la cepa WKY, sugiriendo una incapacidad de los FC de SHR para responder a estos agentes.Demostramos por primera vez la regulacion del gen de la TRH por agentes hipertrofiantes en FC de neonatos. La presencia y regulacion especifica de la TRH en FC plantea la posible participacion de la TRH en la fisopatologia cardiaca ya que esta aumentada en los FC de las SHR presentando un comportamiento diferencial frente a las WKY aun a la edad neonata.