El Trichostatin (TSA), un inhibidor de deacetilasade histonas afecta la expresió de TRH en cultivos neuronales

MARÍA S. LANDA; SILVIA I. GARCÍA; MARIELA M. GIRONACCI; MARIANO L. SCHUMAN; PERES DIAZ LUDMILA; CARLOS J. PIROLA

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LV Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica, Reunion de la Sociedad Argentina de Fisiologia. XLII Reunion de la Sociedad Argentina de Farmacologia Experimental; 2010

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

Además de su función endocrina, la TRH actúa en el sistema nervioso central regulando la función cardiovascular. La modificación de la cromatina afecta la expresión de genes aunque su implicancia en enfermedades cardiovasculares es casi desconocida. Así, estudiamos mecanismos epigenéticos involucrados en la regulación del gen de TRH encefálica. Testeamos el efecto de TSA, sobre la expresión de TRH en cultivos neuronales de neonatos SHR y WKY y  se les extrajo diencéfalo y tallo encefálico para el cultivo primario de las neuronas. Se estimuló con TSA (100, 500, 1000 nM) durante 24hs, se extrajo RNA de las células y se evaluó la expresión génica mediante retrotranscripción y PCR en tiempo real utilizando B-actina como control de carga. Un estudio de curso temporal previo con 500nM mostró que el máximo efecto observado fue a las 24hs. Los resultados corresponden a la relación TRH/Bactina y se expresan como media ± E.S., ANOVA, Test de Fisher.El nivel basal de expresión de TRH fue mayor en las ratas SHR vs WKY (1.3±0.30 vs. 0.4±0.30, p<0.03, n=4/grupo), evidenciando que el mecanismo de expresión diferencial entre las cepas en la edad adulta previamente descripto, está presente al nacer y se mantiene ?in vitro?. El tratamiento no afectó la expresión de TRH en las células WKY a ninguna concentración. Por el contrario, al evaluar el efecto del TSA sobre las neuronas de SHR se observó que a la dosis de 500 nM la expresión del gen disminuyó respecto al control (0.14 ± 0.29 vs 1.30 ± 0.30, p<0.03, n=4/grupo), el tratamiento no afectaría la viabilidad celular ya que ni el conteo celular ni el índice BAX/BCL2  presentaron cambios respecto al control.De esta manera demostramos en cultivos primarios de neuronas que el TSA disminuye la expresión del gen de TRH evidenciando cambios en la regulación epigenética, como la acetilación de histonas, en las SHR sugiriendo que este mecanismo puede ser importante en el desarrollo de la hipertensión arterial