INVESTIGADORES
SCHUMAN Mariano Luis
congresos y reuniones científicas
Título:
Aumento de la hormona liberadora de tirotrofina (TRH) en la apoptosis cardiaca de roedores
Autor/es:
LUDMILA S PERES DIAZ; MARIANO L SCHUMAN; MARIA S LANDA; AZUCENA ALVAREZ; CARLOS J PIROLA; SILVIA I GARCÍA
Lugar:
Buenos Aires Argentina
Reunión:
Congreso; XXXVI Congreso Argentino de Cardiologia; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Cardiologia
Resumen:
Objetivos: Se ha encontrado el sistema de la TRH en el corazón. Aun no se definido su rol en el tejido cardiaco a pesar de que se ha descripto que el sistema se activa luego del infarto de miocardio en el ventrículo izquierdo (vi). Describimos que el sistema de TRH está hiperactivado en el vi hipertrofiado de SHR ya que su bloqueo previene el desarrollo de hipertrofia a pesar de la hipertensión presente. Demostramos que la TRH cardiaca participa en la hipertrofia dado que su inhibición mejora la performance cardiaca. En esta patología, la apoptosis esta involucrada, así nuestro objetivo fue estudiar la participación de la TRH en la apoptosis cardiaca.Estudiamos cultivo de fibroblastos cardiacos (FC) en el cual evaluamos el efecto de la doxorrubicina, un agente cardiotóxico que produce apoptosis a nivel cardiaco y también desarrollamos el modelo de ratón con apoptosis cardiaca por inyección de altas dosis de doxorrubicina.Materiales y Métodos: Realizamos cultivos de FC de ratas macho Wistar estimulados con doxorrubicina y TRH sintética [10 y 100 uM) y cuantificamos la expresión de TRH e índice apoptotico Bax (proapoptotico)/Bcl2[antiapoptotico) mediante real time PCR. Como no hay antagonistas de la TRH, la inhibimos a través de la maniobra de RNA de interferencia que por complementariedad de bases, activa a las enzimas que degradan su mRNA. Se trato con 0,02 nm/placa de TRH-iRNA o mismatch control (Con-IRNA) 24 hs antes de la Doxo para evaluar si la TRH media su efecto proapoptotico y se cuantifico el índice Bax?BcI2. También utilizamos el modelo de apoptosis cardiaca en ratón C57, por doxorrubicina. Los ratones (n6) fueron inyectados i.p. con Doxo 10 mg/Kg o solución fisiologica y fueron sacrificados a los 7 días. Los animales fueron decapitados y se extrajo el corazón y se separo el VI-RNA. Luego se cuantifico el índice Bax/BcI2, la expresión de colágeno I, BNP y alfa-MHC para evaluar el daño y la expresión del gen de TRH.Resultados: La Doxo provoco un aumento significativo del índice apoptotico Bax/BcI2 (p=0.028) indicando la efectividad de la droga. Como esperábamos, observamos un aumento de la expresión de TRH de 4 veces vs. el control (p<0.001) (Anova, Tukey test). Además observamos que la TRH sintética aumento el índice Bax/Bcl2 (p<0.05). Cuando previamente al estimulo con Doxo se realizo el tratamiento con TRH-IRNA o Con-IRNA no se produjo el aumento de la TRH en el grupo TRH-IRNA indicando la eficiencia del bloqueo de la TRH ni tampoco observamos el aumento del gen Bax, aun así, el índice apoptotico Bax/BcI2 se observo significativamente aumentado (p<0.05) y al evaluar los genes de forma independiente se observo que el aumento es a expensas de una disminución significativa del Bcl2 (antipoptotico). In vivo, luego de 7 días post-Doxo observamos un aumento de Bax que no llego a ser significativo pero si observamos un aumento significativo [p<0.001) de la expresión de colágeno I [indicador de fibrosis), de alfa-MHC [marcador de miofibroblastos y de BNP en el grupo de animales tratados con Doxo, demostrando la efectividad del tratamiento. A favor de nuestra hipótesis, en este grupo observamos un aumento muy significaüvo de la expresión del gen de TRH (p<0.001)).Conclusiones: Estos resultados demuestran que en el corazón apoptotico, la TRH esta aumentada. Basados en que en el cultivo con inhibición de TRH, la Doxo no indujo el aumento de Bax previamente observado y dado que ?in vivo? en el modelo de Doxo, se evidencio un aumento muy significativo del gen de la TRH, pensamos que el tripeptido podría estar jugando un rol en el proceso apoptotico. Nuestros resultados muestran que la TRH cardiaca participa de la apoptosis en el corazón de roedores.