MODULACION DE LA EXPRESION DE TRANSGENES EN TRYPANOSOMA CRUZI

CAMARA MM; BOUVIER LA; SAYE M; MIRANDA MR; PEREIRA CA

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2013

En tripanosomátidos la transcripción es de naturaleza policistrónica y la expresión de las secuencias codificantes que forman parte del transcripto primario depende de la reacción de trans-splicing. En esta se adiciona el fragmento ?SL? que aporta la estructura CAP al 5? de la secuencia codificante localizada río abajo y se poliadenila el 3? de la secuencia codificante situada río arriba, determinando así la maduración de los mensajeros. En levaduras fue posible modular la reacción de splicing mediante la adición de un ligando específico para un aptámero estratégicamente ubicado próximo al sitio de splicing 5?. Estos motivos de ARN seleccionados de forma artificial por su capacidad de unión a moléculas complejas, en presencia de las mismas rigidizan su estructura e interferirían de manera estérica con el reconocimiento de señales esenciales para las reacciones de splicing. En este trabajo se construyó un vector integrativo basado en el pTREX con una secuencia intergénica HX1 modificada por inserción de un aptámero para tetraciclina próximo al sitio aceptor del fragmento SL. Se estudió la capacidad de la tetraciclina para modular la expresión de la proteína verde fluorescente, utilizada como gen reportero, en epimastigotes de Trypanosoma cruzi transgénicos para esta construcción. Se observó una correlación entre la concentración de tetraciclina en el cultivo y la disminución en los niveles de expresión de la proteína verde fluorescente. Por otra parte se clonaron los mensajeros para confirmar correcto transplicing de la construcción como así también si ocurrían modificaciones en la misma en la presencia de tetraciclina. El refinamiento de construcciones basadas en aptámeros ofrece la posibilidad de desarrollar herramientas de manipulación genética con las cuales modular la expresión de genes de interés. A su vez estos motivos de ARN constituyen novedosos elementos para el estudio de los mecanismos de trans-splicing en organismos kinetoplástidos.