EFECTO DE LA TOXINA SHIGA 2 Y SUBTILASA EN CELULAS ENDOTELIALES DE MICROVASCULATURA GLOMERULAR HUMANA: ACCION DE UN INHIBIDOR DE LA GLUCOSIL CERAMIDA SINTASA

AMARAL MARIA MARTA; SACERDOTI FLAVIA; SILBERSTEIN CLAUDIA; IBARRA CRISTINA

MAR DEL PLATA-BUENOS AIRES

Congreso; LVI REUNION CIENTIFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACION CLINICA.REUNION CIENTIFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGIA- II CONGRESO NACIONAL Y IV REUNION CIENTIFICA REGIONAL POR EL BIENESTAR DEL ANIMAL DE LABORATORIO Y PROGRESO EN; 2011

La destrucción de las células endoteliales de la microvasculatura renal por acción de la toxina Shiga (Stx), es una de las características del Síndrome Urémico Hemolf1ico (SUH). Se postula que Subtilasa (SubAS), recientemente identificada en cepas de E.coli productor de Stx (STEC), podría contribuir a esta patología. En este trabajo se pusieron a punto cultivos primarios de células endoteliales de microvasculatura de corteza renal humana (CEGH) para evaluar los efectos de Stx2 y SubAS. Las células se obtuvieron de fragmentos de corteza renal provenientes de nefrectomias realizadas en el Hospital Posadas. La expresión del factor von Willebrand y de globotriaosilceramida (Gb3) en CEGH, fueron detectadas por citometría de flujo y cromatografía en capa delgada (TLC), respectivamente. Para los estudios de viabilidad celular, las CEGH se incubaron con distintas concentraciones de Stx2 o SubAS durante 72 hs. La viabilidad se evaluó mediante la incorporación de rojo neutro. La DC50, que corresponde a la dosis de toxina que causa un 50% de mortalidad celular, fue de 1 pg/~1 para Stx2 y tS pg/~1 para SubAS. La necrosis (N) y apoptosis (A) de CEGH fueron analizadas a distintos tiempos por tinción con naranja de acridina-bromuro de etidio y visualizadas por microscopia de fluorescencia. Stx2 (1 O pg/~1) causó más N que A con un aumento significativo a las 4 hs: 41 ,O ± 15,3% vs. 5,2 ± O, 14% (N vs. A, p < 0,05, n=3). En cambio SubAS (3ng/~l) produjo más A que N en todos los tiempos considerados, siendo significativamente mayor a las 6hs: 37,4 ± 2,5% vs. 19,7 ± 4,6% y 24hs: 66,0 ± 11,6% vs. 17,0 ± 5,0% (A vs. N, p < 0,05, n=3).Finalmente, el C-9 (5 ~M. Genzyme Corp.), un inhibidor de la glucosilceramida sintasa neutralizó la acción de Stx2 pero no de SubAB en CEGH pre-tratadas 24 hs con el inhibidor y tratadas con Stx2 (1 O pg/~1) . Estos resultados indican que los efectos de Stx2 son dependientes de la presencia de Gb3 en la superficie de las células de la microvasculatura renal.