Reversión de cambios post-epigenéticos modulados por óxido nítrico durante la hidronefrosis neonatal

MAZZEI LUCIANA; GARCÍA IM; ALTAMIRANO L; MANUCHA W

Tigre,Buenos Aires

Congreso; XXXIII Reunión Científica anual del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial; 2012

Consejo Argentino de Hipertensión Arterial y Sociedad Argentina de Cardiología

Introducción y antecedentes La nefropatía obstructiva (NO) congénita condiciona profundos cambios morfológicos y funcionales renales, donde el programa de desarrollo renal se altera a expensas de cambios en la expresión temporal/espacial de genes como WT-1 y Sall1 que regulan la nefrogénesis. El exceso de apoptosis es un mecanismo indiscutible y está mediado por la sub-expresión de Bcl2, HGF, IGF, BMP7 y sobre-expresión de Bax y TGF-beta. Además, también sufren alteraciones la renina y angiotensina II. En este sentido, pacientes con mutaciones de WT-1 cursan con aumento de la renina plasmática e hipertensión. Por otro lado, nuestro laboratorio informó disminución de la apoptosis con aumento en la bio-disponibilidad de ON asociado a la expresión de Hsp70 y preservación del mensajero de WT-1. Finalmente, la obstrucción ureteral unilateral (OUU) neonatal murina puede ser utilizada como un paradigma en la obstrucción de seres humanos y una plataforma para estudiar el potencial de nuevas terapias para la NO congénita, la insuficiencia renal y el consecuente desarrollo tardío de hipertensión arterial. Objetivos El presente trabajo propuso estudiar la participación y/o interacción existente entre el ON y el factor de transcripción WT-1 en el proceso de inducción a la apoptosis y fibrosis durante el desarrollo de la nefropatía por OUU neonatal. Métodos Ratas neonatales sometidas a OUU recibieron donantes (L-arginina, 100 mg/Kg/día) e inhibidores (L-Name, 50 mg/Kg/día) del ON o rosuvastatina (Ros) (10 mg/kg/día) durante 14 días (n=6). Evaluamos nitritos, Masson para morfometría, dilatación tubular, tamaño, número glomerular y área fibrótica tubulo-intersticial. TUNEL, RT-PCR e histoquímica de Bax/BcL2 (apoptosis). RT-PCR para tgfβ1, tnfα, wt-1, bmp-7, onse y caderina-E. Además se evaluó la expresión y localización de WT-1, Hsp70, ONSe y caveolina-1 por western blot, inmunohistoquímica e IFI. Co-inmunoprecipitación para estudiar posible interacción de proteínas de interés. Finalmente cultivamos células MDCK sometidas a cambios en la disponibilidad del ON y evaluamos nitritos y expresiones de wt-1 y hsp70. Resultados: Durante la OUU, apoptosis y fibrosis intersticial con mayor volumen intersticial fueron asociadas con un reducido nivel del ON, aumento de caveolina-1 y descenso de ONSe y Hsp70. Por el contrario, donantes del ON o Ros, revirtieron estos parámetros con menor interacción caveolina-1/ONSe y mayor interacción Hsp70/ONSe. También, la OUU indujo mayor diámetro tubular (3 veces) y expresión de tgf-ß1 y tnf-α. Además, se redujo el número (50%) y tamaño de glomérulos (30%). Demostramos pobre expresión de wt-1, bmp-7 y caderina-E durante la OUU. Mientras que L-arginina y Ros, atenuaron todos estos parámetros y se conservó la expresión de wt-1. Finalmente, células MCDK sometidas a niveles variables del ON restablecieron las expresiones de wt-1 y hsp70. Conclusiones: En asociación con la preservación de la estructura renal y la inhibición de la fibrosis, presentamos evidencias sobre la posible interacción entre ON y el mantenimiento de la tasa de expresión génica de marcadores claves del desarrollo renal. Estos hallazgos sugieren que la disponibilidad del ON puede proporcionar protección contra la inducción de la fibrosis durante la OUU neonatal, este efecto parece estar mediado por interacciones proteína-proteína entre Hsp70, Caveolina-1 y ONSe.