Tipificación diferencial de las UDTs TcIII y TcIV de Trypanosoma cruzi en base a las secuencias de la región intergénica del gen del miniexón.

CURA C; PENEAU J, ENRIQUEZ GF, OROZCO MM, CARDINAL MV, VALENCIA AYALA E, MÁLAGA MACHACA ES, DA CRUZ MOREIRA O, ALBERTI A, DIOSQUE P, SANTALLA JS, GÜRTLER RE, AZNAR C, SCHIJMAN AG.

Encuentro; XXV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2012

Las poblaciones naturales de T. cruzi están compuestas por clones múltiples, distribuidos en 6 Unidades Discretas de Tipificación (UDTs TcI a TcVI). T. cruzi II/V/VI han sido vinculadas al ciclo domestico; TcIII/IV, al hábitat selvático; y TcI, a ambos. Nuestro equipo cuenta con un algoritmo de caracterización molecular que combina estrategias de PCR convencional basadas en diferentes regiones polimórficas del genoma de T. cruzi, entre las que se encuentra la región intergénica del gen del miniexón (SL-IR). En ocasiones, este algoritmo no permite diferenciar entre TcIII y TcIV. El alineamiento de secuencias SL-IR de referencia nos permitió identificar mutaciones puntuales entre las UDTs, y diseñar una técnica de PCR multiplex en tiempo real con sondas Taqman (PCRTq). En este trabajo, comparamos los resultados obtenidos en la PCRTq y los de secuenciación directa de un fragmento de 200 pb dentro de la SL-IR en aislamientos TcIII/IV obtenidos a partir de muestras de animales y triatominos silvestres de Salta y el Gran Chaco argentino, Brasil, Perú y Guyana Francesa, y de humanos infectados en la Amazonia de Bolivia. El análisis de las secuencias SL-IR nos permitió identificar 27 genotipos TcIII y 15 TcIV. Se observó total correlación con los resultados de la PCRTq, excepto en los casos de infecciones mixtas TcI+TcIII ó TcI+TcIV, donde la reacción multiplex detectó, generalmente, la UDT mayoritaria, o la que para la qPCR presenta mayor sensibilidad analítica (TcI>TcIII>TcIV). Sorprendentemente, tres aislados con genotipos TcIII, resultaron positivos en la PCRTq con las sondas específicas de TcIII y de TcIV, no pudiéndose descartar la presencia de una población parasitaria con diversidad de genotipos SL-IR o la de distintas copias de SL-IR en un mismo clon parasitario. Los resultados obtenidos demuestran la utilidad de la secuenciación directa de la SL-IR, asociada a los algoritmos de tipificación por PCR convencional o en tiempo real, en aquellos casos en que éstos no logren discriminar entre las UDTs TcIII y TcIV.