Cambios temporales en metabolismo de glicerofosfolípidos y fosfatidilcolina en cultivos de fibroblastos sincronizados.

ACOSTA-RODRÍGUEZ VA; MÁRQUEZ S; SALVADOR GA; PASQUARÉ SJ; GARBARINO PICO E; GIUSTO NM; GUIDO ME

Workshop; V Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas.; 2012

Líneas celulares inmortalizadas contienen relojes que regulan distintos eventos celulares y bioquímicos y entre ellos la biosíntesis de fosfolípidos. En este trabajo estudiamos los cambios temporales en la síntesis de glicerofosfolípidos (GFL) y particularmente de fosfatidilcolina (PC). Métodos: Cultivos de fibroblastos quiescentes fueron sincronizados con shock de suero por 2 h y cosechados a distintos tiempos. La marcación metabólica de GFL se realizó con 3H-glicerol y 32P-fosfato. Los niveles de ARNm se determinaron por RT-qPCR y los de proteínas por W. Blot e ICQ. La actividad enzimática se midió "in vitro" con sustratos radiactivos. Resultados: La incorporación de3H-glicerol en GFL totales y PC presentó cambios temporales con mínimos a las 28 y 56 h mientras que la enzima PAP1 mostró menor actividad a las 35 y 56 h. Se observó un patrón temporal diferencial en la expresión y actividad de las enzimas regulatorias de la vía de Kennedy, Colina Kinasa (CK) y CTP:citidililtransferasa (CT). CK presentó variaciones que acompañaron los cambios en la marcación de PC, mientras que CT exhibió una activación abrupta a las 6 y 35 h precediendo dichos aumentos. La expresión de CTa incrementó a las 3 h retornando luego a valores basales, en cambio, CTb aumentó entre las 9-18 h. Ambas isozimas mantienen su localización subcelular nuclear y citoplasmática, respectivamente. Las Acil Transferasas para distintos liso-FL presentaron oscilaciones en su actividad con mínimos a las 14 y 42 h y máximos a las 28 h, evidenciando una ventana temporal diferencial en el remodelado lipídico. Nuestros resultados demuestran que la biosíntesis y remodelado de GFL y PC están sujetos a una compleja regulación temporal en fibroblastos sincronizados.