Actividad de lipasa en hepatopáncreas en el cangrejo eurihalino Neohelice granulata: respuesta en relación al estado osmorregulatorio

MICHIELS, M.S.; PINONI, S.A.; DEL VALLE, J.C.; LÓPEZ MAÑANES, A.A.

Tafí del Valle, Tucumán

Jornada; XXVII Jornadas Científicas de la Asociación de Biología de Tucumán; 2010

A pesar de su importancia fisiológica, faltan estudios sobre existencia, caracterización y modulación de actividad de lipasas en hepatopáncreas de cangrejos eurihalinos. La flexibilidad en el comportamiento osmorregulatorio, la cual constituye una estrategia fisiológica fundamental para cangrejos que habitan zonas con marcada variabilidad en la salinidad, implica demandas diferenciales de energía. Sin embargo, se desconocen los mecanismos de ajustes digestivos a nivel bioquímico (ej. actividad de enzimas digestivas clave en hepatopáncreas) en relación al estado osmorregulatorio. El objetivo fue determinar la existencia, características bioquímicas y respuesta en relación al estado osmorregulatorio de la actividad de lipasa en hepatopáncreas de N. granulata. Machos adultos (n=4) se aclimataron 10 días en 35 ‰ S (caracterización) o en 35 ‰ (osmoconformación), 10‰ (hiperregulación) y 45‰ (hiporregulación) de salinidad (S). Se trabajó con sobrenadante (10000xg 15 min) de homogenato (Tris-HCl 0,1M, pH 7,4) (4 ml x g de tejido-1). La actividad de lipasa (µmoles pNP x min-1 x mg proteína-1) se cuantificó colorimétricamente por hidrólisis de p-nitrofenilpalmitato (pNPP) (curva sustrato: 0,09-0,9 mM en Tris/HCl 50mM, pH 8,5, 37ºC); (curva de pH: buffers fosfato pH 5,4-6,4; Tris/HCl pH 7,2-8,5 y Glicina pH 10,0 pNPP 0,7 mM, 37ºC); curva de temperatura: 4-45°C, pNPP 0.7 mM, pH 8,5). La actividad de lipasa fue mayor a pH 8,5. A pH 5,4-7,2 fue de un 50-70% de la actividad máxima. A pH 10,0 fue un 27 % de la actividad a pH 8,5. La mayor actividad se detectó a 37° C. A 4º, 20º y 45º C, la actividad fue de un 50-60 % de la actividad a 37ºC. La actividad de lipasa exhibió cinética michaeliana (Km=0,18 mM) (pH 8,5, 37ºC). En 35‰ S, el hepatopáncreas exhibió una alta actividad de lipasa (120±39). La actividad de lipasa en 10‰ (55±35) y 45‰ (63±18) S fue menor que en 35‰S (ANOVA p