Las l-asparaginasas de Trypanosoma cruzi

DIGIROLAMO F; MIRANDA M; CANEPA GE; MARTINEZ SAYE M; CAMARA MM; PEREIRA CA

Congreso; XXV Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Protozoología; 2012

Las asparaginasas (EC 3.5.1.1) son enzimas que intervienen en la interconversion y catabolismo de aminoácidos, catalizan la hidrolisis reversible de asparagina a aspartato y amonio. Las asparaginasas se utilizan en la actualidad para tratar diferentes leucemias y linfomas humanos y animales. Su efecto citotóxico se basa en los altos requerimientos de asparagina de las células de tumores linfáticos debido a su alta tasa de replicación que no pueden ser cubiertos con la síntesis de la asparagina sintasa que se encuentra disminuida en estas células. En este trabajo hemos identificado dos genes que codifican para asparaginasas en T. cruzi. TcNasa-1 y TcNasa-2 poseen 54.6 y 43.3 kDa de peso molecular con puntos isoeléctricos notablemente diferentes, 5.8 y 8.6 respectivamente. Estas proteínas poseen una identidad de sólo el 22% en aminoácidos entre sí y ambas estarían dentro del grupo de las asparaginasas denominadas tipo I bacterianas, cuya localización es citosólica. TcNasa-2 fue expresada en E. coli y luego de purificarse se validó su actividad mediante ensayos bioquímicos. Se pudo estimar que TcNasa-2 tiene su máxima actividad a pH neutro, su Km y Vmax fueron calculadas en 22.4 µM - 91.7 µmol/min.mg, respectivamente. Se pudo determinar además que TcAsp2 posee una actividad glutaminasa residual menos al 5% de la actividad asparaginasa. Debido a que las asparaginasas bacterianas utilizadas en tratamientos oncológicos producen reacciones de hipersensibilidad, alergia y anafilaxia, llegando en algunos casos a la muerte del paciente o la suspensión del tratamiento, se están buscando asparaginasas eucariotas para disminuir estos efectos secundarios. Es probable que una asparaginasa eucariota de un parasito humano, como T. cruzi, sea menos inmunogénica que los productos bacterianos disponibles en la actualidad.