Caracterización estructural y funcional del bloque genético gp37-cath-chiA del granulovirus Epinotia aporema (EpapGV)

SALVADOR, R; FERRELLI, ML; BIEDMA, M.E; ROMANOWSKI, V; SCIOCCO-CAP, A

Huerta Grande

Conferencia; XXI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2009

Una de las principales aplicaciones de los baculovirus es su uso como bioinsecticidas y, entre ellos, el Nucleopolyhedrovirus Anticarsia gemmatalis (AgMNPV) es el más ampliamente utilizado. En nuestro país, la plaga homónima se presenta atacando cultivos de leguminosas simultáneamente con Epinotia aporema, para la cual se ha desarrollado un bioinsecticida experimental a base de un granulovirus (E. aporema GV). Estudios previos mostraron que la administración conjunta de estos dos baculovirus produce una disminución en el tiempo letal de AgMNPV hacia larvas de A. gemmatalis y se sugirió que la causa sería la presencia de ciertas proteínas contenidas en las preparaciones de cuerpos de oclusión de EpapGV que facilitarían la entrada de los viriones hacia el sitio inicial de la infección, las células del intestino medio. En base al conocimiento de la secuencia genómica de ambos virus, se iniciaron estudios tendientes a evaluar genes con posible efecto en la infección primaria, específicamente los que actúan sobre la membrana peritrófica (mp) de las larvas, primera barrera que deben traspasar los viriones para alcanzar las células intestinales. Se inició la búsqueda de los factores descriptos hasta el momento en la bibliografía como capaces de actuar sobre la mp.Inicialmente se realizaron estudios con microscopia electrónica de barrido (MEB) de membranas peritróficas de Anticarsia gemmatalis sometidas a mezclas virales. Mediante la técnica de PCR no pudo confirmarse la presencia del gen vef (viral enhancin factor) en el genoma de EpapGV. Se clonaron y secuenciaron los genes gp37,cath y chiA, con los cuales, empleando un sistema de expresión baculoviral se obtuvieron recombinantes y proteínas utilizadas para ensayos funcionales. Debido a que el bloque gp37-cath-chiA se encuentra ausente en el genoma de AgMNPV, se clonaron estos genes de forma individual y en bloque en vectores de transferencia que permitió la obtención de recombinantes que actualmente están siendo evaluados.Existen antecedentes que sostienen que los homólogos bacterianos a gp37 y chiA interactúan incrementando la actividad catalítica de la quitinasa. La ausencia de estos genes en el genoma de AgMNPV permite por un lado, la utilización de este virus como modelo en estudios funcionales de estos genes; y por otro, evaluar si estos mismos contribuyen a aumentar la eficacia de AgMNPV como agente de biocontrol.