INVESTIGADORES
FERREIRA GOMES Mariela Soledad
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización cinética de un posible intermediario de transporte de Ca2+ en la Ca2+-ATPasa de membrana plasmática expresada en un sistema de Baculovirus.
Autor/es:
FERREIRA GOMES, M. S.; DE LA FUENTE, M C; GONZÁLEZ-LEBRERO, R. M.; ROSSI, R. C.; ROSSI J. P. F. C.
Lugar:
Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina
Reunión:
Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
La existencia de un gradiente de potencial electroquímico para el Ca2+ en las células, permite que el flujo de este ión en respuesta a señales extracelulares se constituya en un segundo mensajero. La bomba de Ca2+ de membrana plasmática (PMCA) es fundamental para el mantenimiento de este gradiente.
La PMCA es una P-ATPasa cuyo mecanismo catalítico consiste en un ciclo de reacciones que involucran transiciones conformacionales, tanto en las formas fosforiladas (E1PE2P) como en las desfosforiladas (E1E2). En el proceso de transporte de Ca2+, este ión se une a sitios citoplasmáticos de la enzima (E1) para luego ser liberado en la transición E1P®E2P. Se postula que la fosforilación de la enzima sería simultánea con la oclusión de Ca2+.
Hemos desarrollado una metodología para medir el estado ocluído del Ca2+ a partir de la sobreexpresión de la proteína en Baculovirus, que permite obtener preparaciones microsomales enriquecidas en distintas isoformas tanto fisiológicas como patológicas de la PMCA. Determinamos la oclusión Ca2+ mediante la combinación de un aparato de mezclado rápido y una cámara de filtración con un tiempo de resolución de 3.5 ms. La unión de Ca2+ se midió en presencia o ausencia de 2 mM o 25 uM ATP, 37.4 μg/ml de proteína, 100 uM (45Ca)Ca2+, 3 mM Mg2+ y con y sin 50 uM LaIII .
La unión de Ca2+ en función del tiempo presentó un comportamiento bifásico: una primera fase rápida (180 ms) que estaría describiendo el proceso de oclusión; y una segunda fase lenta que representaría la acumulación de Ca2+ dentro de las vesículas. En conclusión nuestros resultados preliminares indican que la metodología implementada permite medir la desaparición transitoria del catión durante el transporte a través de la membrana. Esto permitirá el estudio de diversas isoformas de PMCA y postular el mecanismo detallado del transporte de calcio a través de la membrana.
Con subsidios de ANPCYT, CONOCET y UBACYT