Caspasa-3 activa y citoqueratina-18 clivada como marcadores tempranos de apoptosis en pacientes pediátricos con hepatitis B crónica.

SALVATIERRA, K.; DE MATTEO, E.; VALVA, P.; GALOPPO, C.; MARIA VICTORIA PRECIADO

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

La infección crónica por virus de la hepatitis B (HBV) se caracteriza por daño celular, inflamación y fibrosis que puede llevar a cirrosis y/o desarrollo de hepatocarcinoma. Muchas evidencias sugieren que la apoptosis (inducida tanto por el infiltrado inflamatorio como por ciertas proteínas virales) participa de la patogénesis. Los métodos morfológicos clásicos de tinción y el TUNEL identifican una etapa terminal de la apoptosis del hepatocito, inclusive el TUNEL no diferencia por completo necrosis de apoptosis. En la búsqueda de nuevos marcadores tempranos de apoptosis investigamos la activación de caspasas y la presencia de neoepitopes generados sobre sus sustratos, como la citoqueratina 18 (CQ18), una de las proteínas más abundantes del citoesqueleto de los hepatocitos. El objetivo de este trabajo fue determinar la activación de caspasa-3 (casp-3a) efectora y la presencia de uno de sus sustratos clivados (CQ18 clivada, M30) en biopsias hepáticas de pacientes pediátricos con infección por HBV, establecer su relación con la expresión de antígeno de Core (HBVcAg) y con parámetros bioquímicos e histológicos. Se estudiaron 22 biopsias hepáticas fijadas en formol incluidas en parafina de 20 pacientes [8 varones y 12 mujeres; mediana de edad: 9 años (máx.-min.:1-18 años), sin coinfección con HIV o HCV]. Se evaluó en la biopsia: fibrosis, actividad (inflamación), esteatosis, daño de conductos biliares y presencia de folículos linfoides. Se detectó HBVcAg, casp-3a y M30 mediante inmunohistoquímica y se cuantificó por recuento el n° de hepatocitos positivos/n° total de hepatocitos en 20 campos (1000X). Para el análisis estadístico se utilizó prueba de t Student para comparación de medias y Pearson para correlación, considerando significativo p< 0,05. Los casos estudiados mostraron 68,2% ALAT elevada en suero y en las biopsias: actividad leve (22,7%) y moderada (77,3%); fibrosis grado 1 (22,7%), grado 2 (59,1%) y grado 3 (18,2%); esteatosis (31,8%); daño de conductos biliares (50%) y folículos linfoides (54,5%). No se observó cirrosis ni hepatitis crónica severa en ningún caso. En los pacientes con más de una biopsia no se observó progresión del daño histológico. El 81,8% de los casos fue HBVcAg+ [mediana del recuento: 0,16 (máx-min: 0,37-0,03)], el 90,9% de los casos fue M30+ [mediana: 0,014 (0,098-0,005)] y el 90,9% de los casos fue casp-3a+ [mediana: 0,057 (0,21-0,01)]. El número de hepatocitos M30+ al igual que el de casp-3a+ fue mayor en el grupo de pacientes con valores aumentados de ALAT. Se observó asociación estadísticamente significativa entre el número de hepatocitos M30+ y el grado de fibrosis (p=0,008 t Student), hepatitis (p=0,002 Mann-Whitney) y la presencia de folículos linfoides (p=0,03 t Student). Casp-3a no mostró asociación con ninguno de los parámetros histológicos. La presencia de HBVcAg y los marcadores tempranos de apoptosis no mostraron correlación estadísticamente significativa. La presencia de casp-3a y M30 como marcadores tempranos de apoptosis, sugiere la participación de este mecanismo en la patogenia de la infección crónica por HBV. El mayor número de hepatocitos casp-3a+ respecto de M30+ en los casos estudiados, puede reflejar que casp-3a participa de diversas funciones biológicas y posee otros sustratos además de CQ18. La asociación observada entre M30+ y folículos linfoides conjuntamente con la ausencia de correlación entre HBVcAg y los marcadores tempranos de apoptosis en las biopsias estudiadas, sustentaría la hipótesis de que el daño hepatocelular y la fibrosis son consecuencia de la inducción de la apoptosis mediada por la respuesta inmune.