Caracterización de mutaciones de splicing en el gen de la PPOX

BX GRANATA; BARALLE M; BARALLE F; ROSSETTI MV

Mar del Plata . Buenos Aires

Congreso; LVII REUNIÓN CIENTÍFICA DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA - LX REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INMUNOLOGÍA; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Las porfirias son un grupo de desordenes metabólicos causados por la deficiencia parcial primaria de alguna de las enzimas involucradas en la biosíntesis del grupo hemo. Cuando la enzima afectada es la protoporfirinogeno oxidasa (PPOX), se desarrolla la llamada Porfiria Variegata (PV), enfermedad de herencia autosómica dominante. En 2008 reportamos tres mutaciones nuevas las cuales afectarían el splicing dado que dos de ellas son intrónicas (c.338+3insT y c.808-1 G>C) y la restante (c.807 G>A), a nivel proteico, genera un cambio sinónimo. Los ensayos de RT-PCR realizados a partir de muestras de los pacientes no brindaron resultados concluyentes, por lo cual diseñamos minigenes para estudiar su efecto. La mutación c.808-1 G>C provoca exon skipping, resultado consistente con la interrupción del dinucleótido 100% conservado AG de la unión exón/intrón. En el caso de c.807 G>A, los resultados iniciales fueron complementados con ensayos de rescate de splicing en presencia de U1, encontrándose también skipping, lo cual nos llevó a hipotetizar un efecto de la mutación sobre el sitio de unión a U1. Por último, c.338+3insT fue ensayada en dos minigenes diferentes y uno de ellos en presencia de U1, encontrándose una fuerte banda de skipping del exón, aún cuando en el WT el perfil no es tan claro. De acuerdo a los resultados, las tres mutaciones causan exon skipping, lo cual lleva al mRNA proveniente del alelo portador de la falla del paciente a degradación por el mecanismo de NMD, razón de la manifestación de PV.