Estudio de los mecanismos subyacentes a la imhibicion de la trombopoyesis inducida por anagrelide.

ESPASANDIN Y, MARTA R, VALENTINO J, GLEMBOTSKY A, MOLINAS F, HELLER P.

Mar del Plata

Congreso; Reunion Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2011

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

El anagrelide (ANA) disminuye las plaquetas en pacientes con Trombocitemia Esencial. Previamente hallamos que, adem¨¢s de su acci¨®n en la megacariocitopoyesis, inhibe la fase final de la producci¨®n plaquetaria o trombopoyesis. Sin embargo, esta disminuci¨®n en la formaci¨®n de proplaquetas (PP) observada con la dosis ensayada (500nM) se asoci¨® a inhibici¨®n concomitante de la maduraci¨®n y viabilidad del megacariocito (MK). Para discernir entre ambos efectos, se cultivaron MK a partir de CD34+ de cord¨®n umbilical y se incubaron al d¨ªa 13 con dosis decrecientes de ANA. El %MK formadores de PP en cultivos control fue 3.23¡À1.9% y con ANA 500nM, 250nM, 100nM, 50nM, 25nM, 10nM, 5nM, 0.07¡À0.1%, 0.07¡À0.1%, 0.34¡À0.1%, 0.54¡À0.2%, 1.48¡À0.2, 1.55¡À0.1%, 2.22¡À0.1%, comprob¨¢ndose que dosis ¡Ü100nM no modificaron la viabilidad ni maduraci¨®n del MK. En experimentos posteriores con ANA 50nM (n=6) vs control, se hall¨® disminuci¨®n del %PP, 0.31¡À0.2% vs 1.47¡À1.1%, p=0.03, sin diferencias en la pureza, %CD41: 70.8¡À2 vs 70.7¡À2, maduraci¨®n, %CD41+42b+: 54.6¡À2 vs 57.2¡À2 y viabilidad del MK: 31,6¡À1% vs 33,7¡À2%. Para investigar el mecanismo subyacente, nos propusimos estudiar la expresi¨®n de factores involucrados en la trombopoyesis. Se incubaron MK, purificados por sorter (pureza 98%), con ANA 50nM y se estudi¨® por PCR en tiempo real el factor de transcripci¨®n NF-E2 (isoforma f), cuya expresi¨®n relativa (2-DDCt) en MK tratados con ANA (vs control=1) fue 1.1. El estudio de otras mol¨¦culas con rol clave en la trombopoyesis, como Rab27b, tubulina, MAL/SRF y la cadena liviana de la miosina, en curso, contribuir¨¢ a establecer si el efecto sobre la trombopoyesis est¨¢ relacionado con la modulaci¨®n de la expresi¨®n g¨¦nica de los factores que regulan este proceso. La acci¨®n directa del ANA sobre las proplaquetas sugiere que el bloqueo de la trombopoyesis contribuye a su efecto reductor de plaquetas, de relevancia en base al aumento de la trombopoyesis descripto recientemente en la Trombocitemia Esencial.