Estudio de los mecanismos subyacentes a la inhibición de la trombopoyesis inducida por Anagrelide

ESPASANDÍN YÉSICA; MARTA ROSANA; VALENTINO JESICA; GLEMBOTSKY ANA; MOLINAS FELISA; HELLER PAULA

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual. Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2011

Sociedad Argentina de investigación Clínica (SAIC)

El anagrelide (ANA) disminuye las plaquetas en pacientes con Trombocitemia Esencial. Previamente hallamos que, además de su acción en la megacariocitopoyesis, inhibe la fase final de la producción plaquetaria o trombopoyesis. Sin embargo, esta disminución en la formación de proplaquetas (PP) observada con la dosis ensayada (500nM) se asoció a inhibición concomitante de la maduración y viabilidad del megacariocito (MK). Para discernir entre ambos efectos, se cultivaron MK a partir de CD34+ de cordón umbilical y se incubaron al día 13 con dosis decrecientes de ANA. El %MK formadores de PP en cultivos control fue 3.23±1.9% y con ANA 500nM, 250nM, 100nM, 50nM, 25nM, 10nM, 5nM, 0.07±0.1%, 0.07±0.1%, 0.34±0.1%, 0.54±0.2%, 1.48±0.2, 1.55±0.1%, 2.22±0.1%, comprobándose que dosis ≤100nM no modificaron la viabilidad ni maduración del MK. En experimentos posteriores con ANA 50nM (n=6) vs control, se halló disminución del %PP, 0.31±0.2% vs 1.47±1.1%, p=0.03, sin diferencias en la pureza, %CD41: 70.8±2 vs 70.7±2, maduración, %CD41+42b+: 54.6±2 vs 57.2±2 y viabilidad del MK: 31,6±1% vs 33,7±2%. Para investigar el mecanismo subyacente, nos propusimos estudiar la expresión de factores involucrados en la trombopoyesis. Se incubaron MK, purificados por cell sorter (pureza 98%), con ANA 50nM y se estudió por PCR en tiempo real el factor de transcripción NF-E2 (isoforma f), cuya expresión relativa en MK tratados con ANA (vs control=1) fue 1.1. El estudio de otras moléculas con rol clave en la trombopoyesis, como Rab27b, tubulina, MAL/SRF y la cadena liviana de la miosina, en curso, contribuirá a establecer si el efecto sobre la trombopoyesis está relacionado con la modulación de la expresión génica de los factores que regulan este proceso. La acción directa del ANA sobre las proplaquetas sugiere que el bloqueo de la trombopoyesis contribuye a su efecto reductor de plaquetas, de relevancia en base al aumento de la trombopoyesis descripto recientemente en la Trombocitemia Esencial.