INQUISAL   20936
INSTITUTO DE QUIMICA DE SAN LUIS "DR. ROBERTO ANTONIO OLSINA"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de un método rápido para la cuantificación de Botrytis cinerea en frutas almacenadas
Autor/es:
FERNÁNDEZ BALDO, MARTÍN A; FERNÁNDEZ, JORGE G; PEREIRA, SIRLEY V; MESSINA, GERMÁN A; RABA, JULIO; SANZ, MARÍA I
Reunión:
Congreso; 6to Congreso Argentino de Química Analítica.; 2011
Resumen:
Botrytis cinerea es un hongo fitopatógeno responsable de la
podredumbre gris, enfermedad que afecta cultivos de importancia económica [1].
Frecuentemente se presenta como infección latente (fruta aparentemente sana)
pudiendo deteriorarse repentinamente, debido a la evolución de la misma,
apareciendo los síntomas visibles de la enfermedad [1]. También es difícil de
controlar mediante la utilización de fungicidas debido a su variabilidad
genética y el desarrollo de cepas resistentes a muchos productos utilizados
[2]. Actualmente, existen presiones de los consumidores a reducir estos
productos en la cadena alimentaria y el medio ambiente [3, 4]. Por estas
razones, es importante contar con métodos de detección y cuantificación del
fitopatógeno que sean simples y rápidos a los efectos del tratamiento adecuado
de las frutas.
En el presente trabajo se
desarrolló y validó un método rápido para la cuantificación de B. cinerea en manzanas (Red Delicious),
uvas de mesa (Moscatel rosada), y peras (Williams). La determinación de B. cinerea se realizó mediante un
inmunoensayo competitivo indirecto, donde antígenos purificados del hongo
fueron inmovilizados sobre microplacas mediante un agente entrecruzante. Los
antígenos presentes en la muestra, compiten inmunológicamente por un anticuerpo
monoclonal, anti B. cinerea IgG de
ratón, con los antígenos purificados inmovilizados, el cual es detectado
mediante un segundo anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con la enzima
peroxidasa utilizando una solución sustrato de ortofenilendiamina. La respuesta
obtenida del producto de la reacción enzimática fue medida por
espectrofotometría a 490 nm y es inversamente proporcional a la cantidad de
antígenos de B. cinerea presentes en
la muestra de fruta.
Para el desarrollo del método
propuesto se realizaron estudios de reactividad cruzada entre el anticuerpo
monoclonal empleado y otros hongos fitopatógenos frecuentemente aislados en
estas muestras de frutas en Argentina. Además, el método desarrollado fue
validado frente a un método de cuantificación de ADN específico de B. cinerea [5]. Estos estudios mostraron
una buena correlación.
El método propuesto mostró
elevada sensibilidad y menores límites de detección que otros métodos desarrollados
hasta el momento [4, 6] siendo capaz de detectar la presencia del hongo aún en
frutas que no mostraban síntomas visibles de la enfermedad, presentando además,
las ventajas de bajo costo, fácil operación y corto tiempo de análisis,
evidenciando su posible aplicación en la industria agroalimentaria en el
control de calidad fitosanitario.