“Análisis de la Incorporación de las Glicoproteínas de Envoltura de Partículas de Tipo Viral de arenavirus producidas en un sistema de Genética Reversa”.

CASABONA J.C; JESICA M. LEVINGSTON MACLEOD; NUNBERG J; NORA LOPEZ

Congreso; Reunión Nacional de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular 2009; 2007

Sociedad Argentina de Virologia

El virus Tacaribe (VTac) es el prototipo de los arenavirus del "Nuevo Mundo", grupo que incluye los 4 patógenos productores de fiebres hemorrágicas conocidos en Sudamérica: los virus Junín, Machupo, Guanarito y Sabia. El genoma de VTac consiste en dos segmentos de ARN de simple cadena, denominados S y L. El segmento S codifica para la nucleoproteína (N) y para el precursor (GPC) de las glicoproteínas de envoltura G1 y G2. La nucleoproteína se asocia con ambos segmentos de ARN viral formando las nucleocápsides. En el segmento L, se encuentran codificadas las proteínas L (polimerasa viral) y una pequeña proteína llamada Z. Con el objeto de estudiar las bases moleculares de la morfogénesis de arenavirus, nuestro grupo desarrolló un sistema de genética reversa que reconstituye la transcripción, la replicación y la incorporación de un minigenoma (MG) a partículas de tipo viral (PTVs). Este sistema fue utilizado para el análisis de la incorporación de G1 y G2 a PTVs mediante Inmunoprecipitación (IP) y Western Blot (WB), revelando que esta incorporación es dependiente del ensamblado de Z y N en las mismas. Para comenzar a definir los motivos implicados en la incorporación de las glicoproteínas a PTVs, GPC fue reemplazada por mutantes en el motivo de miristoilación, en el consenso de clivaje del precursor GPC y en la región intracitoplasmatica carboxi-terminal. Se analizó la expresión de dichos mutantes, así como el efecto de los mismos sobre la replicación del MG, evidenciada por la expresión de un gen reportero. A su vez se midió la capacidad de las PTVs producidas de transferir el MG a nuevas células en ensayos de infección. Además la incorporación de las glicoproteínas a PTVs fue demostrada por IP. Los resultados indican que la incorporación de G1 y G2 a PTVs es dependiente del ensamblado de Z y N en las mismas. A su vez el correcto procesado de la GPC a G1 y G2, o la miristoilación del precursor GPC no serían esenciales para la incorporación de las glicoproteínas a las PTVs, mientras que la región intracitoplasmática de G2 sería crucial en este proceso.