INVESTIGADORES
CASABONA Juan Cruz
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis de las regiones /aminoácidos implicados en la interacción entre la proteína Z y la nucleoproteína, relevantes para la formación de partículas de tipo viral en arenavirus.
Autor/es:
JESICA M. LEVINGSTON MACLEODE; CASABONA J.C; LOUREIRO M.E; GÓMEZ G; NORA LOPEZ
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología.; 2008
Institución organizadora:
SAV
Resumen:
El virus Tacaribe (VTac) es el prototipo de los arenavirus delNuevo
Mundo y conforma un linaje filogenético con los patógenosproductores de
fiebres hemorrágicas conocidos en Sudamérica, entrelos que se cuenta el
virus Junín (VJun). Los arenavirus son virusenvueltos, cuyo genoma está
constituido por dos segmentos de ARNde cadena simple (llamados S y L).
El ARN S codifica para lanucleoproteína (N) y para el precursor de las
glicoproteínas de envoltura(GPC). El ARN L codifica para una ARN
polimerasa ARNdependiente (proteína L) y para la proteína Z, que
contiene un dominioRING. Los ARNs genómicos están asociados a la
proteína N formandolas ribonucleoproteínas (RNPs), las cuales son el
templadopara la transcripción y la replicación del ARN viral. La
proteína Z tieneun rol central en la morfogénesis viral y se ha
demostrado quepuede inducir la formación de partículas de tipo viral
(PTVs), cuandose la expresa en células eucariotas en ausencia del resto
de los componentesvirales. Nuestro grupo ha desarrollado un sistema
degenética reversa que dirige la replicación y la incorporación de
unminigenoma a PTVs, en células que expresan un ARN análogo alARN S de
VTac, las proteínas L y N de VTac y las proteínas Z y GPCde VJun, a
partir de plásmidos transfectados. Utilizando este sistema,hemos
encontrando previamente que Z es la única proteína viralimplicada en la
incorporación de N a las PTVs. Mas aun, en célulasque expresan
únicamente Z y N, encontramos que N es incorporadaa las PTVs donde se
encuentra protegida por una envoltura lipídica.Con el objetivo de
identificar los aminoácidos (aa)/motivos de Zinvolucrados en la
incorporación de N a las PTVs, generamos unaserie de mutantes puntuales
de Z. Las PTVs formadas luego de lacoexpresión de las mutantes de Z con
la proteína N se analizaron porWestern blot. Además, las mutantes de Z
fueron ensayadas en elcontexto del sistema completo, en el cual la
presencia de RNPs enlas PTVs obtenidas se analizó mediante ensayos de
infección. Lasposibles interacciones entre las mutantes de Z o la
proteína Z salvajey N fueron analizadas por microscopia confocal y
mediante ensayosde coinmunoprecipitación. Por otra parte, iniciamos el
mapeo de lasregiones de N involucradas en la interacción con Z. Con tal
fin, segeneraron mutantes por deleción de la proteína N. Se ensayó la
incorporacióna PTVs de las mutantes de N luego de la coexpresión con
Z.Además, se realizó el análisis funcional de las mutantes de N en
elcontexto del sistema de genética reversa. Los datos obtenidos
indicanque los residuos L49 y L79 así como la integridad de la
estructura RINGen Z, son esenciales para: i) la transferencia del
minigenoma a célulasfrescas por las PTVs producidas en el sistema
completo, ii) la incorporaciónde N a PTVs obtenidas luego de la
coexpresión de N y Zen ausencia de otros componentes del sistema y iii)
para la interacciónentre N y Z. Los resultados indican además que el
extremo C-terminalsería la región de N involucrada en la incorporación
de esta proteína alas PTVs. CONCLUSION: Nuestros resultados sustentan la
hipótesisde la incorporación de las nucleocápsides a las partículas
virales enforma dependiente de la interacción entre N y Z.