INVESTIGADORES
CASABONA Juan Cruz
congresos y reuniones científicas
Título:
El Cambio de un único aminoácido en el dominio II de la proteína L del Virus Tacaribe afecta la Interacción con la proteína Z
Autor/es:
WILDA M; NORA LOPEZ; CASABONA J.C; MARIA T. FRANZE-FERNANDEZ
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología.; 2008
Institución organizadora:
SAV
Resumen:
El
virus Tacaribe (VTac) es el prototipo de los arenavirus del
NuevoMundo, grupo que incluye los 5 patógenos productores de
fiebreshemorrágicas conocidos en Sudamérica: los virus Junín
(VJun),Machupo, Guanarito, Sabia y Chapare. El genoma de VTac poseedos
segmentos de ARN de simple cadena, denominados L y S. Enel segmento L,
se encuentran codificadas la proteína L (ARN polimerasaviral) y una
pequeña proteína llamada Z, la cual posee un rolcentral en la brotación
de las partículas virales. El segmento S codificapara la nucleoproteína
(N) y para el precursor (GPC) de lasglicoproteínas de envoltura. El
precursor GPC es procesado en formaposttraduccional por proteasas
celulares en tres unidades que,asociadas mediante interacciones no
covalentes, conforman el complejoglicoproteico maduro. Estas unidades
son: el péptido señal (SP),que es miristilado e intervendría en el
tráfico intracelular de GPC, laproteína G1 que estaría involucrada en el
reconocimiento de receptorescelulares, y G2 que participaría en la
fusión de la envoltura delvirión con la membrana de la célula infectada.
A su vez, en G2 sedefinen tres regiones: la región ectocitoplásmatica,
la región transmembrana(TM) y el dominio citoplasmático (CTD). Con el
objetivode estudiar las bases moleculares de la morfogénesis de
arenavirus,nuestro grupo ha desarrollado un sistema de genética reversa
basadoen la coexpresión (a partir de plásmidos transfectados) de
lasproteínas L y N de VTac y Z y G de VJun, en conjunto con un
minigenomaanálogo al ARN S de VTac (MG). Este sistema reconstituyela
transcripción, la replicación y la incorporación del MG a partículasde
tipo viral (PTVs). En este trabajo, analizamos los requerimientospara la
incorporación de las glicoproteínas a PTVs. Para eso, lascélulas
transfectadas fueron marcadas con precursores radioactivos.Los
sobrenadantes celulares fueron colectados y las PTVs producidasfueron
concentradas por ultracentrifugación y analizadas en formaparalela con
los lisados celulares por Inmunoprecipitación (IP).Los resultados
indicaron que la eficiencia de incorporación de lasglicoproteínas a
PTVs, medida como la relación entre la cantidad deG1 y la de Z
incorporadas, fue de 5 a 10 veces mayor en PTVs producidaspor células en
las que GPC fue coexpresada con Z y N, respectoa las producidas en
células en las que GPC y Z fueroncoexpresadas en ausencia de N. Para
comenzar a definir los motivosimplicados en la incorporación de las
glicoproteínas a PTVs, seevaluaron mutantes de GPC con modificaciones en
los motivos relevantespara la biogénesis del complejo glicoproteico
maduro. Se utilizóuna mutante (G2A) que contiene una substitución que
impide lamiristilación del SP, así como una mutante con modificaciones
en lasecuencia consenso de clivaje del precursor GPC a G1 y G2. Por
otraparte, se construyeron mutantes con deleciones en la zona
carboxiterminalde G2, así como también una quimera en la cual se
reemplazóla zona CTD de VJun por la correspondiente a la glicoproteínade
membrana CD4. En primer lugar se analizó la expresión de losGPC
mutantes por IP e inmunofluorescencia indirecta. Posteriormente,se
evaluó tanto la incorporación de las diferentes glicoproteínasmutantes a
PTVs marcadas por IP, así como la capacidad de lasmismas de mediar la
transferencia del MG a nuevas células en ensayosde infección.
CONCLUSION: Los resultados obtenidos indicanque la miristilación del
precursor GPC o el correcto procesamientodel mismo a G1 y G2, no
conforman un requisito indispensable parala incorporación de las
glicoproteínas a las PTVs. Por otro lado, sediscutirá la importancia de
las regiones TM y CTD de GPC para elcorrecto ensamblado e infectividad
de las PTVs.