Estudios en mutantes de NADH deshidrogenasa-2, una enzima implicada en el metabolismo del cobre en Escherichia coli

JOSEFINA M. VILLEGAS; SABRINA I. VOLENTINI; LUISA RODRÍGUEZ MONTELONGO; VIVIANA A. RAPISARDA

Tucumán

Jornada; 1º Jornadas de Jovenes Investigadores; 2007

UNT- AUGM

Introducción: NADH deshidrogenasa-2 (NDH-2) de E. coli es una flavoproteína de membrana con actividad Cu(II)-reductasa. Estudios bioinformáticos postularon 4 dominios en la enzima. El objetivo del trabajo fue determinar la implicancia funcional y estructural del dominio IV (posiblemente relacionado con el anclaje a la membrana) y de las cisteínas en el dominio III. Materiales y métodos: Las mutantes se construyeron por mutagenésis sitio dirigida. Las actividades enzimáticas se determinaron por espectrofotometría y la localización celular por SDS-PAGE. Resultados: Las mutaciones en los residuos C315 y C318 del dominio III conducen a la inactivación de NDH-2, mientras que la mutación del residuo C339 no produce modificaciones. La eliminación del dominio IV produce disminución de la actividad enzimática y posible degradación proteolítica de la enzima. Conclusiones: El motivo C315XXC318 y el dominio IV son esenciales para las actividades enzimáticas, mientras que el residuo C339 cumpliría un rol regulatorio.