INIBIBB   05455
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BAHIA BLANCA
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Presencia de Diacilglicerol quinasa dzeta en núcleos de vertebrados
Autor/es:
NATALINI, PAOLA; ZULIAN SANDRA,; ILINCHETA BOSCHERO, MÓNICA GRACIELA; GIUSTO NORMA,
Lugar:
Bahía Blanca
Reunión:
Jornada; II Jornadas de Postgrado del Departamento de Biología Bioquímica y Farmacia; 2011
Institución organizadora:
Departamento de Biología Bioquímica y Farmacia UNS
Resumen:
Los fosfolípidos (FL) nucleares se localizan tanto en la envoltura como en la matriz nuclear y asociados a la cromatina. La señal lipídica intranuclear está relacionada con FL del inositol, de la colina y el ciclo de deacilación. La actividad DAGK se ha asociado al control de la activación de PKC, con participación en la señalización de factores de crecimiento. La isoforma DAGK dzeta (tipo IV) se ha probado que, en células en cultivo, se localiza en núcleos y regula la concentración de DAG. El objetivo de este trabajo fue determinar su presencia y actividad en los núcleos de la retina de vertebrados. La presencia se determinó en dos modelos, en cortes de retina (rata) y en núcleos aislados de retina (bovinos). Se utilizó inmunohistoquímica e inmunofluorescencia. Para medir actividad se aislaron los núcleos de las retinas bovinas y se ensayaron en condiciones de activación de la isoforma. Las retinas fueron homogeneizadas en medio TKM con sacarosa 0.25 M y purificadas en un gradiente de sacarosa. El pellet representa una fracción nuclear compleja y su pureza se chequeó por tinción con DAPI. La medida de la actividad DAGK se realizó utilizando DAGs marcados (glicerol-[3H]). El ensayo de DAGK se realizó en micelas de detergente-lípido utilizando Tritón X100 y 2 mM de ATP. La actividad enzimática se midió aislando el ácido fosfatídico (PA) mediante CCF. En 5 y 10 min de incubación se detectó formación de PA (1,2 y 2,5 % del sustrato DAG fue transformado) y la fosfatidilserina (activador de la isoforma dzeta) estimuló la actividad en un 250 %. R59022, inhibidor de isoformas de tipo I, inhibió parcialmente dicha actividad (40 %). Los resultados indican que la isoforma se halla presente en los núcleos de la retina y que las condiciones de ensayo son adecuadas para su estudio.