INVESTIGADORES
FONSECA Maria Isabel
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTO DEL CuSO4 SOBRE LA EXPRESIÓN DEL GEN DE lacasa EN Ganoderma applanatum CEPA B NATIVO DE MISIONES
Autor/es:
SAWOSTJANIK AFANASIUK SS; FONSECA MI; ZAPATA PD; VILLALBA LL
Reunión:
Congreso; XL Congreso Argentino de Genética; 2011
Resumen:
Ganoderma applanatum es un hongo de pudrición
blanca de la madera, de interés por la
potencial
aplicación biotecnológica de sus enzimas
ligninolíticas.
Una de las enzimas más importantes del
complejo es
la lacasa. En este sentido hemos
demostrado que el
cobre aumenta su actividad en G.
applanatum, aunque
queda por determinarse si la inducción se
produce a
nivel transcripcional, traduccional, o
postraduccional.
El objetivo del presente trabajo fue
determinar el
efecto del CuSO4
sobre la expresión del gen de
lacasa en Ganoderma applanatum cepa B,
nativo
de Misiones. Se realizaron cultivos en
condiciones
óptimas de producción enzimática
inoculando un
taco de micelio en medio líquido (ME)
conteniendo
12,7g/L extracto de malta, 0,5% p/v
extracto soluble
de maíz, y ME suplementado con 0,2mM de
CuSO4;
tras 7 días de crecimiento se extrajo ARN
total, el
cual fue semicuantifi cado y utilizado para
realizar RTPCR.
La reacción de retrotanscripción se
realizó en un volumen
de 22µl conteniendo 5µg de ARN, 0,5µg de cebador Oligo-dT,
5 X Buffer, 2,8mM dNTPs, 20 U de Inhibidor
Ribonucleasa y 1 U de Trancriptasa Reversa.
La
PCR se realizó en un volumen de 20µl conteniendo
1X Buffer,
2,5mM Mg
Cl, 0,36mM dNTPs, 10pmol
de cada cebador, 0,5 U de Taq Polimerasa,
y 2µl
de producto de RT; como control de
técnica, se
amplifi có un fragmento de actina. Se
demostró que el CuSO4
induce la expresión del gen de lacasa
a
nivel transcripcional evidenciado por una
banda de
150 pb cinco veces más intensa en los
tratamientos
adicionados con CuSO4