INVESTIGADORES
FONSECA Maria Isabel
congresos y reuniones científicas
Título:
EFECTO DEL COBRE EN LA SECRECIÓN DE ENZIMAS LIGNINOLÍTICAS DE Ganoderma applanatum CEPA A DE IMPORTANCIA BIOTECNOLÓGICA.
Autor/es:
TEJERINA, MARCOS R; FONSECA, MARIA I; VILLALBA, LAURA L; ZAPATA, PEDRO D
Reunión:
Congreso; XII congreso argentino de microbiología; 2010
Resumen:
Introducción: Ganoderma
applanatum, es un hongo ligninolítico, que presenta un amplio espectro de
enzimas como la lacasa (Lac) y manganeso peroxidasa (MnP), aplicables en
procesos relacionados con la industria de la pulpa y el papel y los
biocombustibles entre otros.
Objetivo: Analizar el efecto del cobre sobre la actividad enzimática (Lac y
MnP), el crecimiento en biomasa y la secreción de proteínas totales en G.
applanatum cepa A
Materiales y métodos: La cepa A de G. applanatum BAFC 1168 fue inoculada
en medio de cultivo líquido (extracto de malta 12,7 g/L y extracto soluble de
maíz 5 g/L) durante 7, 10 y 14 días; con 0,2 mM,
0,5mM y sin SO4Cu. La cuantificación de la actividad enzimática de
Lac y MnP se determinó por espectrofotometría, utilizando como sustrato DMP
(2,6-dimetoxifenol) y SO4Mn respectivamente. Las proteínas totales
se cuantificaron mediante la técnica de Bradford, utilizando como solución
patrón la albúmina sérica bovina. El crecimiento en biomasa se determinó como
peso seco del micelio. El análisis estadístico se realizó mediante el programa
estadístico GraphPad Prism 5. Para la detección de isoenzimas Lac fueron
sembrados 20 µg de proteína por muestra en zimogramas no desnaturalizante
(ND-PAGE al 7,5%). El revelado se realizó sumergiendo el gel en una solución
conteniendo DMP 5 mM en
buffer acetato 0,1 M,
pH 3,6 hasta la aparición de bandas. El peso molecular de las isoenzimas fue determinado
en geles desnaturalizante SDS-PAGE.Resultados: El efecto del
cobre fue significativo (p <0,001) tanto en el crecimiento en Biomasa como
en la secreción de proteínas, produciendo un efecto negativo con el transcurso
de los días.
El cobre produjo un incremento de actividad enzimática Lac (p <0,001) en
concentraciones de 0,2 mM,
mientras que en la actividad MnP no produjo un efecto significativo (p >
0,05). Se determinó que el cobre induce isoenzimas Lac que van desde los 70
hasta los 127 KDa.
Conclusiones: El cobre produjo un efecto negativo en el crecimiento en Biomasa
y secreción proteica, mientras que produjo un efecto positivo en la actividad
enzimática Lac, no así en la actividad MnP. El agregado de cobre también
produjo la inducción de isoenzimas Lac. Estos resultados motivan a profundizar
los estudios incluyendo otras variables para obtener producción enzimática a
gran escala y aplicarlas biotecnológicamente a la industria celulósica-papelera
o a la primera fase de fabricación de Biocombustible.