INVESTIGADORES
SANSBERRO Pedro Alfonso
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de cebadores de Tubulina β específicos de Ilex paraguariensis, para análisis de expresión genética
Autor/es:
ACEVEDO, M.; RUIZ, O.; SANSBERRO, P.
Lugar:
Corrientes
Reunión:
Jornada; XXIII Reunión de Comunicaciones Científicas y Técnicas; 2011
Institución organizadora:
Fac. Ciencias Agrarias (UNNE)
Resumen:
Para poder detectar pequeñas variaciones, los análisis de expresión genética requieren alta
sensibilidad, precisión y especificidad para la secuencia del ARNm en estudio. La
Transcripción Reversa seguida de PCR en Tiempo Real (RT-PCR) se ha convertido en el
método de elección por cumplir estos requisitos. En los ensayos, las variaciones de
expresión entre diferentes muestras, se analizan mediante cuantificación relativa del gen de
interés. Para ello, estos valores se deben normalizar con respecto a un gen de referencia
definido como control interno, debido a que su nivel de expresión no se ve afectado por el
experimento ni por las condiciones fisiológicas; y no presenta variabilidad entre distintos
individuos. En plantas, el gen de la Tubulina ß presenta una gran estabilidad y por ello es
ampliamente utilizado como gen de referencia. En la yerba mate actualmente no se dispone
de secuencias relacionadas a este gen. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue diseñar
cebadores del gen de Tubulina ß, específicos para Ilex paraguariensis. Para lograrlo, se
utilizaron cebadores diseñados sobre regiones conservadas encontradas sobre un
alineamiento de 26 secuencias de Tubulina ß disponibles en GenBank® (National Center for
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
utilizaron cebadores diseñados sobre regiones conservadas encontradas sobre un
alineamiento de 26 secuencias de Tubulina ß disponibles en GenBank® (National Center for
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
Ilex paraguariensis. Para lograrlo, se
utilizaron cebadores diseñados sobre regiones conservadas encontradas sobre un
alineamiento de 26 secuencias de Tubulina ß disponibles en GenBank® (National Center for
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
® (National Center for
Biotechnology Information) de diferentes especies vegetales, con la menor distancia
filogenética posible a nuestra especie. Estos cebadores fueron inespecíficos ya que
presentaron dos bandas de distintos tamaño en la electroforesis en gel de agarosa. Ambos
productos fueron clonados en Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®Escherichia coli DH5α, y secuenciados en MacroGen®
(Corea del Sur), encontrando similitud significativa con Tubulina ß en uno de ellos. En la
región interna de esta secuencia se diseño un par de cebadores, que presentaron un único
producto de amplificación, que fue clonado y secuenciado, repitiéndose la misma secuencia
interna sobre la que fue diseñado. Lo que permite afirmar que se trata de cebadores de
Tubulina ß, específicos para Ilex paraguariensis. La obtención de estas secuencias
específicas, son el primer paso necesario para avanzar en los análisis de los niveles de
expresión genética. Siendo necesario a continuación, validarlos como gen de expresión
constitutiva.
específicas, son el primer paso necesario para avanzar en los análisis de los niveles de
expresión genética. Siendo necesario a continuación, validarlos como gen de expresión
constitutiva.
Ilex paraguariensis. La obtención de estas secuencias
específicas, son el primer paso necesario para avanzar en los análisis de los niveles de
expresión genética. Siendo necesario a continuación, validarlos como gen de expresión
constitutiva.