Expresion del correpresor de la actividad de receptores de estr¡§®geno en fol¡§ªculos ov¡§¢ricos bovinos normales y qu¡§ªsticos.

ALFARO N; SALVETTI NR; RODR¡§ªGUEZ FM; PANZANI CG; AMWEG AN; ORTEGA HH

Jornada; XII Jornadas de Divulgacion Tecnico Cientificas en Ciencias Veterinarias. Facultades de Ciencias Veterinarias ¡§C Universidad Nacional de Rosario y Universidad Nacional del Litoral, Esperanza, Santa Fe, Setiembre de 2011.; 2011

El represor de la actividad del receptor de estr¨®geno (REA: Represor of Estrogen receptor Activity) es una prote¨ªna correpresora dependiente de ligando que interacciona espec¨ªficamente con los receptores de estr¨®genos (RE) suprimiendo marcadamente su actividad transcripcional, pero no la de los otros receptores de hormonas esteroides y no esteroides. Adem¨¢s, REA compite por los mismos sitios de uni¨®n al RE con el coactivador de receptor de esteroides 1 (SRC-1) actuando de este modo de manera anti-coactivador y correpresor. Estudios realizados en ratones Knock Out (KO) para el gen REA mostraron individuos no viables, sin embargo el uso de KO condicionados a ciertos ¨®rganos (gen ausente solo en los ¨®rganos espec¨ªficos para su estudio) mostraron que este correpresor tambi¨¦n tiene una acci¨®n importante en la regulaci¨®n del RE¦Á en los ¨®rganos reproductivos de la hembra (Park y col 2005). La enfermedad qu¨ªstica ov¨¢rica (del ingl¨¦s: Cystic Ovarian Disease: COD) es uno de los desordenes reproductivos m¨¢s comunes en vacas lecheras. Numerosos autores han analizado la etiolog¨ªa de la enfermedad considerando un desequilibrio a nivel del eje hipot¨¢lamo-hip¨®fisis-gonadal como la hip¨®tesis m¨¢s aceptada (Garverick 1997). Sin embargo, estudios recientes sugieren que la variaci¨®n en los patrones de expresi¨®n de prote¨ªnas correguladoras presentes en las c¨¦lulas del ovario podr¨ªa jugar un rol potencial en la disfunci¨®n ov¨¢rica (Lonard y col 2005). A pesar del avance en  el estudio de estas mol¨¦culas en diversas condiciones no hemos encontrado antecedentes sobre su expresi¨®n en el ovario bovino con COD. Es por eso que en este trabajo nos propusimos evaluar el patr¨®n de expresi¨®n del correpresor REA en las distintas estructuras foliculares de ovarios sanos y con COD. Se utilizaron muestras de ovarios obtenidas en frigor¨ªfico. Los ovarios fueron examinados para determinar el di¨¢metro folicular y la presencia o ausencia de cuerpo l¨²teo activo. De este modo se clasificaron los ovarios como provenientes o no de vacas con COD. Las muestras fueron reducidas e inmediatamente fijadas en formol al 10% durante 8hs, lav¨¢ndose luego en buffer fosfato salino y proces¨¢ndose siguiendo protocolos de rutina para efectuar la inclusi¨®n en parafina. Luego, se efectuaron cortes seriados, de 4 mm de espesor sobre los que se realiz¨® una t¨¦cnica inmunohistoqu¨ªmica indirecta para la determinaci¨®n de REA. La reacci¨®n fue revelada utilizando 3,3' diaminobencidina como crom¨®geno (Ortega et al., 2007). La especificidad del anticuerpo, se analiz¨® por Western Blot en muestras de ovario. Se evalu¨® la inmunoreacci¨®n  en c¨¦lulas de granulosa y teca de fol¨ªculos primarios, secundarios, terciarios y qu¨ªsticos. Se encontr¨® marcaci¨®n citoplasm¨¢tica y nuclear con REA  en todos los estratos celulares de las categor¨ªas estudiadas. Se observ¨® que en todas las estructuras foliculares analizadas la expresi¨®n de REA fue mayor en las c¨¦lulas de la granulosa que en las de la teca. En fol¨ªculos terciarios de vacas sanas el patr¨®n de marcaci¨®n de REA fue significativamente mayor (p<0.05) con respecto a fol¨ªculos terciarios de vacas con la enfermedad y a las estructuras qu¨ªsticas. En teca externa se evidenci¨® similar expresi¨®n de REA a lo hallado en teca interna. Por Western Blot se detect¨® una banda a aproximadamente 37 KDa que se correspondi¨® con el peso molecular de REA. Basados en estos resultados podr¨ªamos inferir que las alteraciones en la expresi¨®n de REA podr¨ªan modificar los mecanismos de regulaci¨®n de la transcripci¨®n en las c¨¦lulas foliculares ov¨¢ricas, participando en la patogenia de esta enfermedad.