Calbindina D28k protege a células germinales de ratones subfértiles de la apoptosis mediada por vía mitocondrial

G. DÍAZ DE BARBOZA; V. MERICO; V. RODRÍGUEZ; R. PONCE; S. GARAGNA; N. TOLOSA DE TALAMONI

Mar del Plata

Congreso; LII Reunión Científica de la SAIC-LV Reunión Científica de la SAI-Reunión de la SAFIS; 2007

SAIC, SAI, SAFIS

Ratones híbridos subfértiles (2n=32) surgidos del cruzamiento de hembras CD1 (2n=40) y machos Milan II (2n=24) presentan fusiones Robertsonianas. Es conocido que las gametas que presentan rearreglos en su cariotipo muestran incremento en la muerte celular. En trabajos previos se demostró que la proteína calbindina D28k (CB) aumenta su expresión en células germinales de túbulos seminíferos que presentan una elevada muerte celular por apoptosis. Dado que CB puede prevenir la muerte celular actuando a diferentes niveles de la cascada apoptótica, nos propusimos evaluar su posible rol en la prevención de la apoptosis de células germinales analizando la vía mitocondrial. Para ello, se estudió la expresión de CB, de la proteína pro-apoptótica BAX y la localización de citocromo c, mediante el empleo de técnicas inmunohistoquímicas sobres secciones de testículo, usando anticuerpos específicos. La fragmentación del ADN, se evaluó por la técnica de TUNEL. Los resultados revelaron muerte de espermatocitos en metafase del estadio XII a los 3 meses (m) de edad, efecto que incrementó con el tiempo. Paralelamente, CB aumentó su expresión en el mismo estadio y tipo celular, pero sólo se observó colocalización CB-TUNEL en el 13% de las células CB positivas. Los animales parentales presentaron un mínimo de apoptosis de células germinales y de expresión de CB en el mismo estadio. En los híbridos de 5 m, el 72% de los espermatocitos en metafase expresó BAX, el 64% mostró localización citoplasmática de cit.c y tinción de TUNEL positiva, mientras que el 52% reveló expresión de CB. Sólo el 15% y 11% de células CB positivas mostró colocalización con BAX o cit. c, respectivamente. Los resultados sugieren que la expresión de CB en algunos espermatocitos en metafase previene su muerte celular al impedir los mecanismos mitocondriales involucrados en la apoptosis. De esta manera, algunos espermatozoides alcanzan la madurez y permiten conservar parcialmente la fertilidad del ratón híbrido.