La combinación de paclitaxel con carbacol produce un efecto muerte-sobrevida en células MCF-7. Vías de señalización implicadas

GUILLERMINA JACOB; ALEJANDRO J ESPAÑOL; ROBERTO A. DIEZ; MARIA E. SALES

Congreso; 56 va Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

La resistencia a la quimioterapia es crítica en la terapéutica antitumoral, siendo la combinación de drogas antitumorales una posibilidad para mejorar su efecto individual. Demostramos que el agonista muscarínico carbacol (CARB) promueve la muerte de células tumorales de mama humana MCF-7. Este efecto se potencia al combinarlo con paclitaxel (PTX). En este trabajo investigamos las vías de señalización activadas en células MCF-7 tratadas con PTX (10-11M) + CARB (10-8M). PTX+CARB incrementaron la muerte de células MCF-7 en un 39±2% (p<0,001 vs. basal) sin modificar la viabilidad de células normales de  mama MCF-10A, medida por MTT. El efecto se redujo por el pretratamiento con: atropina (AT) (10-5M), antagonista muscarínico; NCDC (10-5M), inhibidor de fosfolipasa C (PLC) o L-NMMA (10-4M), inhibidor de las óxido nítrico sintasas (NOS) (p<0,001 vs. PTX+CARB) y se potenció con NOHA (10-4M) inhibidor de arginasas (Arg) o con MG-132 (2x10-5M) inhibidor de la vía del factor nuclear kB (NF-kB). En las células MCF-7 que sobreviven al tratamiento con CARB+PTX observamos un aumento del 42±5% (p<0.01 vs. basal) en la actividad de NOS, medida como nivel de nitrito por el método de Griess. Este efecto se revirtió al preincubar las células con AT, NCDC o L-NMMA y se potenció con NOHA o MG-132. Comprobamos mediante ensayos colorimétricos que el tratamiento con PTX+CARB también incrementó la actividad de Arg, medida como nivel de urea, en un 26±3% (p<0,01 vs. basal). Por Western blot, demostramos que PTX+CARB incrementaron la expresión de ambas isoformas de Arg (p<0,001 vs. basal), efecto que se revirtió en presencia de MG-132. Concluimos que la asociación PTX+CARB ejerce un efecto dual con participación de NF-kB: potencia la citotoxicidad sobre células tumorales de mama humana, pero en la fracción de células que sobreviven al tratamiento se observa un incremento en la actividad de NOS así como en la expresión y actividad de Arg, que las haría resistentes