Comparación del efecto de la activación muscarínica entre células NIH3T3 bajo estímulo inflamatorio y células tumorales SCA-9. Participación de óxido nítrico sintasas y ciclooxigensas

MADDALENO MARIANO; ESPAÑOL ALEJANDRO; SALES MARÍA ELENA

Congreso; 56 va Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Se ha documentado que la inflamación crónica está asociada con patologías como el cáncer. Demostramos que en fibroblastos normales NIH3T3, la activación muscarínica modula la actividad de las óxido nítrico sintasas (NOS) y las ciclooxigenasas (COX). Investigamos comparativamente el efecto de la activación muscarínica en células tumorales SCA-9 y  NIH3T3 tratadas 72 h con lipopolisacárido de E. coli (10 ng/ml) e interferón gama (0,5 ng/ml).  La proliferación se determinó por MTT como porcentaje respecto de basal (100%); la actividad de NOS por el método de Griess y la actividad de COX por RIA de prostaglandina E2 (PGE2). El tratamiento con el agonista muscarínico carbacol (Carb) aumentó la proliferación con una concentración efectiva máxima de 10-7M (148±4%) para NIH3T3 y de 10-9M (131±2%) para SCA-9 (p<0,001 vs. basal). El efecto se revirtió al preincubar con el antagonista muscarínico atropina (AT) (10-6M) o con los inhibidores enzimáticos: de NOS2, aminoguanidina (AG) (10-3M); de NOS3, I134 (10-5M); de COX, indometacina (INDO) (10-6M); de COX-2, NS-398 (10-5M) o del factor nuclear kB (NF-kB), IMD354 (5x10-6M) (p<0,001 vs. Carb). Comprobamos que el Carb estimuló la actividad de NOS en un 26±4% para NIH3T3 y en un 72±26% para SCA-9 (p<0,001 vs. basal). El efecto se revertió en presencia de AT, AG, I134, INDO, NS398 e IMD354 (p<0,001). Además el Carb incrementó la producción de PGE2 en NIH3T3 (70±17%) y en SCA-9 (85±6%) (p<0,001 vs. basal) y este efecto se revirtió al preincubar las células con AT, INDO, NS-398 e IMD354 (p<0.001 vs. basal); pero mientras que en NIH3T3 la preincubación con AG e I134 redujo el efecto del Carb, en las SCA-9 lo incrementó. Concluimos que la estimulación muscarínica promueve la proliferación  tanto en células normales NIH3T3 en condiciones inflamatorias como en células tumorales SCA-9. En este proceso que presenta un complejo “cross talk”, participan enzimas inflamatorias como NOS-2 y COX-2 siendo regulado por NF-kB.