xShroom1 regula el número de canales ENaC insertados en la membrana de ovocitos de Xenopus Laevis

GALIZIA L; OZU M; ASSEF Y; MARINO G; OJEA A; KOTSIAS BA

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión de la Sociedad argentina de Biofísica; 2011

SAB

Shroom es una familia de proteínas asociadas al citoesqueleto de actina.xShroom1 se encuentra constitutivamente expresada en los ovocitos deXenopus laevis y es requerida para la expresión de canales de sodiosensibles a amiloride (ENaC). Los ovocitos fueron inyectados con α, β y γmENaC y con los oligonucleótidos xShroom sense o antisense. Utilizamosla técnica de clampeo de voltaje para estudiar las corrientes de sodiosensibles a amiloride (INa (amil)).Observamos una marcada reducción de las corrientes INa (amil) en losovocitos inyectados con el antisense de xShroom1 (Ginward de -160 a 0 mV:36 ± 12 LS y 1.80 ± 0.50 LS con xShroom1 sense y antisense). Los ovocitosque expresan una mutante DEG de la subunidad β-mENaC (βS518K) conuna probabilidad de apertura de 1, tienen una corriente incrementada quetambién se reduce al inyectar el antisense de xShroom1. La incubación contripsina en bajas concentraciones, que activa canales ENaC residentes enmembrana lleva a un incremento lento de la INa (amil) en ovocitos conxShroom1 sense pero no tiene efecto en los ovocitos coinyectados conantisense xShroom1. Realizamos inmunofluorescencias y no observamospresencia de αβγ-mENaC en la superficie membrana de los ovocitosinyectados con xShroom antisense.En experimentos preliminares observamos que el efecto negativo de lainyección con el antisense de xShroom1 puede ser restituido sólo en unapequeña fracción al incubar con forskolina que reduce la tasa de endocitosisde ENaC. Adicionalmente los tratamientos con inhibidores de ladegradación de proteínas por la vía lisosomal (cloroquina) o proteosomal(MG-132) no incrementan las corrientes INa (amil) de los ovocitosinyectados con xShroom antisense. En conjunto estos resultadospreliminares sugieren que la ausencia de la proteína xShroom1 reduce elnúmero de canales ENaC en la membrana al afectar su tráfico y no sudegradación.