INVESTIGADORES
TEKIEL Valeria Sonia
congresos y reuniones científicas
Título:
Patrón de expresión y localización celular de la familia TcTASV de T. cruzi.
Autor/es:
GARCÍA, EA; ZILIANI, M; IGLESIAS, AA; SANCHEZ, DO; TEKIEL, V
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2011
Institución organizadora:
Soc Arg de Protozoologia
Resumen:
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Patrón de expresión y localización celular
de la familia TcTASV de T. cruzi.
Garcia E, Ziliani M, Iglesias AA, Sánchez
D, Tekiel V.
La familia de proteínas
TcTASV (por Tripomastigote, Alanina, Serina, Valina) está compuesta por ~40
miembros y fue identificada por nuestro grupo a partir de una biblioteca de
cDNA de tripomastigotes. La familia TcTASV está conservada en cepas de
diferentes linajes (CL Brener, RA, Sylvio, Dm28) y no posee ortólogos en otros
tripanosomatideos. Predicciones bioinformáticas indican la presencia de
numerosos sitios de glicosilación y fosforilación y su expresión en superficie.
Además, un gen TcTASV fue identificado entre un grupo de antígenos protectivos,
lo que sugiere que podrían ser buenos candidatos vacunales. Las características
distintivas de la familia TcTASV son las secuencias conservadas en las regiones
amino y carboxi terminales; la región central variable permite definir tres
subfamilias (A, B, C). Las subfamilias TcTASV-A y TcTASV-C son las que tienen
mayor cantidad de miembros. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el
patrón de expresión y localización de las familias TcTASV-C y TcTASV-A. Para
ello, se produjeron antisueros contra un péptido conservado de la familia
TcTASV-A (amino ácidos 57-72 de GenBank AM492199, en conejo) y contra la región
interna de un miembro de TcTASV-C (amino ácidos 65-330 de GenBank AZ050960, en
ratón) y los anticuerpos purificados por afinidad se emplearon en ensayos de
inmunoflorescencia, marcación in vivo y western blot. TcTASV-C se expresa como una proteína de ~60 kDa
principalmente en el estadio tripomastigote y con abundancia relativa diferente
entre cepas (CL>Sylvio>RA). TcTASV-C también es detectada en
sobrenadantes de medio de cultivo de tripomastigotes, lo que sugiere su expresion
en superficie y shedding. Análisis
de citometría de flujo luego de la marcación de tripomastigotes vivos con
anti-TcTASV-C confirman su expresión en superficie y diferencial entre cepas
(CL: 57%, RA: 24%). Mediante IFI, se detectan tripomastigotes expresando
TcTASV-C como puntos discretos en la superficie celular; además es posible
observar en un mismo campo- parásitos fuertemente marcados y otros con
intensidad intermedia o sin marca. En contraste, sólo se evidenció marcación
para TcTASV-A permeabilizando los parásitos y si bien hay tripomastigotes
débilmente marcados- la mayor intensidad de marca se detecta en formas
redondeadas extracelulares (amastigote-like) y amastigotes intracelulares. En
conjunto, estos resultados estarían indicando que aunque ambas familias tienen
secuencias consenso para expresión en superficie- TcTASV-A y C no tienen la
misma localización y poseen expresión diferencial entre estadios.