INVESTIGADORES
SIGOT Valeria
congresos y reuniones científicas
Título:
APLICACIÓN DE QUANTUM DOTS COMO BIOSENSORES DEL DAÑO INDUCIDO POR PRESERVACIÓN HIPOTÉRMICA EN EL TRANSPORTE ENDOCÍTICO. EVALUACIÓN EN CULTIVO PRIMARIO DE HEPATOCITOS DE RATA.
Autor/es:
PAULA HOVANYECZ; VALERIA SIGOT; JOAQUÍN RODRÍGUEZ; EDGARDO ELVIO GUIBERT
Reunión:
Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011
Resumen:
El transporte endocítico mediado por receptores requiere la integridad
de las membranas celulares para la activación e internalización de complejos
ligando-receptor. Esta integridad se ve alterada durante la preservación
hipotérmica (PH), etapa previa a la aplicación en transplante celular. Si bien
existen técnicas como el análisis de liberación de lactato dehidrogenasa (LDH)
para evaluar la viabilidad celular e integridad de la membrana, permitiendo
sólo una cuantificación global del daño. En este trabajo se propone la
evaluación de la injuria celular inducida por frío monitoreando el transporte
endocítico a nivel de células individuales luego de la PH seguida de
reoxigenación normotérmica (RN). Utilizando nanopartículas fluorescentes,
Quantum Dots (QDs) conjugadas al ligando factor de crecimiento epidérmico
(EGF), se siguió la internalización mediada por receptor de los complejos
preformados biotina-EGF:estreptavidina-QDs (EGF-QDs). El sistema se evaluó en
cultivo primario de hepatocitos de rata (HC) y preservados (HP) a 4°C en
solución de la Universidad de Wisconsin.
Grupos experimentales
Incubación con complejos QD-EGF a 37°C
HC24
· 5
min. y 120 min.
· 5
min. QD sin ligando (control).
HP24 y HP72 unión (t0)
· 5 min.
HP24 y HP72 t120
· 120 min.
RN (37ºC, 5% CO2).
El % de
liberación de LDH en los HC24 y HP24 (t0 y t120) y HP72 (t0) (19±7 (n=7), 5±3
(n=7), 11 (n=2) y 9 (n=2) %, respectivamente) no reveló daño celular, lo cual
se correlaciona con el análisis microscópico que mostró tanto la unión como la
internalización de los complejos. No se observó unión inespecífica de los QDs
no conjugados a EGF. El daño en la
membrana se observó en HP72 t120 con un 91±5 % de liberación de LDH (n=2). Los
QDs inicialmente unidos en HP72 t0 no fueron internalizados luego de la RN.
Mediante esta técnica los QDs podrían ser utilizados como sensores del daño
inducido por la PH en la capacidad para el transporte endocítico de hepatocitos
previo a su aplicación en trasplante celular.