Estudio funcional del microRNA miR-71 en parásitos cestodos modelo

ANDRES GRECCO; NATALIA MACCHIAROLI; MARCELA CUCHER; MARA ROSENZVIT

CABA

Simposio; XXI Simposio Mundo Sano; 2023

MUNDO SANO

Mesocestoides vogae (syn.M.corti) es un parásito platelminto validado comomodelo de laboratorio para el estudio de la clase Cestoda, la cual incluyeespecies como Echinococcus granulosus sensu lato que causan enfermedadestropicales desatendidas como la equinococosis quística o hidatidosis. LosmicroRNAs (miRNAs) son pequeños RNAs no codificantes. Su rol principalconsiste en la regulación de la expresión génica a nivel post-transcripcionalinhibiendo la expresión de mRNAs blanco mediante reconocimiento de sitios ensus 3’UTR. miR-71 es un miRNA altamente expresado en cestodos, ausente envertebrados y con genes blanco esenciales para la biología parasitaria, por loque representa un potencial blanco selectivo para el tratamiento de lascestodiasis. En trabajos previos de nuestro grupo se realizó el silenciamiento invitro de miR-71 en cultivos celulares primarios de E. multilocularis. El objetivo deeste trabajo es lograr el silenciamiento in vitro de miR-71 en parásitos completosen particular en tetratiridios (estadío larvario de M. vogae) e identificar sus genesblanco. Por último, se pretende analizar las posibles alteraciones en el desarrolloy en la capacidad de infección luego del silenciamiento de este miRNA.Para realizar el silenciamiento de miR-71 se utilizaron anti-miRs, los cuales sonoligonucleótidos complementarios al miRNA de interés que bloquean su función.La expresión de miR-71 se cuantificó mediante RT-qPCR luego de latransfección con anti-miR-71 (9 μM). La predicción de genes blanco de miR-71se realizó mediante los algoritmos miRanda y RNAhybrid y luego se realizó elanálisis de sobreexpresión mediante RT-qPCR. Se evaluó a su vez el procesode estrobilización tras el silenciamiento de miR-71 mediante inducción contaurocolato de sodio. Finalmente, se inocularon parásitos previamentesilenciados por vía intraperitoneal en ratones BALB/c a fin de determinaralteraciones en la capacidad y el establecimiento de la infección.Mediante la administración de anti-miR-71 se logró el silenciamiento de miR-71en un porcentaje de 64% respecto al grupo control. Entre los genes blancosobreexpresados de miR-71 se encontraron factores de transcripciónrelacionados con procesos de desarrollo. En cuanto a los efectos fenotípicos, seobservó una mayor tasa de estrobilización en cultivos transfectados con anti-miR-71. Respecto a la capacidad de infección, aquellos ratones inoculados conparásitos con miR-71 silenciado presentaron una masa parasitaria tres vecesmenor respecto a los grupos control al cabo de 17 días de infección.Estos resultados brindan conocimiento acerca de la función de los miRNAs en labiología de parásitos cestodos y sientan la base para el análisis de su potencialcomo blancos de drogas de enfermedades parasitarias desatendidas.