Inmunodetección de NFk-β en células Rodlet en riñón e hígado de Gymnotus carapo

GONZALEZ FRANCO; MENDEZ GALARZA SABRINA; GROSS EDUEN; AGUIRRE MA. VICTORIA; OLEA GABRIELA

Corrientes

Jornada; XI SESIÓN DE COMUNICACIONES CIENTÍFICAS ESTUDIANTILES FACULTAD DE CIENCIAS VETERINAS. UNNE; 2023

FCVet-UNNE

Los peces son organismos de vida libre que dependen de su sistema inmunológico innato para sobrevivir. Este sistema es fundamental para los mecanismos de defensa contra patógenos invasores. El mismo está constituido por componentes inmunológicos diversos e interdependientes. Uno de los rasgos característicos es que cada componente tiene su valor protector inherente y está relacionado con una respuesta inmune. Las células Rodlet (CR) son células del sistema inmune, ubicadas principalmente en el riñón, hígado, bazo y timo que son los principales órganos inmunológicos de los peces, aunque con funciones ligeramente diferentes entre especies. Este estudio tiene como objetivo establecer la inmunomarcación para el factor nuclear potenciador de las cadenas ligeras kappa de las células β activadas (NFkβ) de las células Rodlet en el hígado de Gymnotus carapo proporcionando algunos antecedentes sobre su papel potencial en el sistema inmunológico de los peces. Para ello de un total de 32 ejemplares de G. carapo se procedió a la elaboración de preparados histológicos de riñón e hígado siguiendo el protocolo convencional y posteriormente para la determinación de la inmunomarcación de NFkβ, se utilizó como anticuerpo primario el policlonal anti NFkβ a una dilución de trabajo 1:250 y el kit de revelado según el protocolo indirecto de “L-streptoavidina biotina” - HRP (DAKO K0690). Se realizó permeabilización de las membranas celulares por incubación con Tritón X-100 al 1% en PBS durante 5 min y bloqueo de peroxidasas internas con H2O2 al 3% en PBS durante 10 min. Previo a la incubación de las muestras con el anticuerpo se realizó un bloqueo con 5% de leche descremada en PBS. Luego de lavar el anticuerpo con PBS se incubó por 10 min. con el anticuerpo secundario biotinilado universal de DAKO (K0679) listo para usar. Se lavó el anticuerpo secundario y se incubó con la estreptoavidina conjugada a peroxidasa de Rábano picante (HRP), lista para usar (DAKO K0690) durante 10 min. Se lava con PBS y se revela la peroxidasa con el cromógeno diaminobenzidina (DAB) de DAKO (K3468) durante 5 min. Se utiliza hematoxilina como tinción de contraste. Se realizó un control negativo incubando con el secundario y terciario de DAKO, pero sin la incubación con el anticuerpo primario anti NFkβ. Se pudo evidenciar tanto en el riñón como el hígado de la especie en estudio una inmunomarcación positiva en las CR en sus diferentes estadios de maduración, las mismas aparecen aisladas en el parénquima de ambos órganos y en los vasos sanguíneos. Asimismo se detecto inmunomarcación positiva en aquellas CR asociadas a los centros melanomacrófagos en el riñón. La fuerte inmunorreactividad positiva de los constituyentes celulares del hígado y riñón para NFkβ sugieren el papel fundamental de las CR en la inmunidad.