RELEVANCE OF AKT SUMOYLATION IN MOUSE EMBRYONIC STEM CELLS

FRANCIA, MARCOS; COSENTINO, MARÍA SOLEDAD; VAZQUEZ ECHEGARAY, CAMILA; TORO, AYELEN; SOLARI, CLAUDIA; PETRONE, MARÍA VICTORIA; WAISMAN, ARIEL; BARAÑAO, LINO; SREBROW, ANABELLA; GUBERMAN, ALEJANDRA

Congreso; LXII Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2017

Las células madre embrionarias (CME) poseen la capacidad de auto-renovarseindefinidamente y de dar origen a células de las tres capas germinales. La víaPI3K/Akt es clave en el mantenimiento de los niveles y actividad de los factoresde transcripción Oct4, Sox2 y Nanog, fundamentales en CME2. En los últimosaños, se reportó que la SUMOilación de la isoforma Akt1 tiene un rol crítico en la regulación de su actividad con consecuencias en el patrón de splicing, laproliferación y el ciclo celular de diferentes tipos celulares . Nuestra hipótesis postula que la SUMOilación de Akt es relevante para mantener las propiedades fundamentales de CME y está involucrada en su supervivencia y proliferación. Para evaluar esta hipótesis, estudiamos el efecto de esta modificación posttraduccional (MPT) de Akt1 en la regulación de la expresión de Nanog y realizamos la puesta punto de la inducción de apoptosis y detección de este proceso en CME.En primer lugar, realizamos una co-transfección con vectores de expresión de variantes de Akt1 con diferente capacidad de ser SUMOiladas junto con un vector reportero del sistema Luciferasa controlado por el promotor deNanog. Encontramos una actividad diferencial de este promotor dependiendo delnivel de SUMOilación de Akt, sugiriendo que esta MPT podría modular laexpresión de Nanog en CME. Por otro lado, para determinar la relevancia de laSUMOilación de Akt1 en la regulación de la proliferación y supervivencia,evaluamos diferentes condiciones para inducir apoptosis en nuestro sistema. Elcultivo de CME en ausencia de la citoquina LIF y delos inhibidores?2i? por hastadías resultó ser una buena condiciónpara inducir apoptosis, detectada tanto por la técnica de DNA Ladder, como por clivaje de PARP-1 y Caspasa 3 medianteWestern Blot. Nuestros resultados preliminares sugieren que la SUMOilación deAkt1 podría tener un efecto sobre la expresión de Nanog. Consideramos queestudiar la regulación de las propiedades fundamentales de CME es esencial parasu futura aplicación en el área de la medicina regenerativa.