ROL DE LA METILTRANSFERASA PRMT8 EN CÉLULAS MADRE PLURIPOTENTES

LUZZANI, CARLOS; SOLARI, CLAUDIA MARÍA; WAISMAN, ARIEL; LOSINO, NOELIA; SEVLEVER, GUSTAVO; BARAÑAO, LINO; MIRIUKA, SANTIAGO; GUBERMAN, ALEJANDRA

Congreso; LVIII Reunión Científica Anual Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2013

Las células madre embrionarias (ESCs) son células derivadas del macizo celular interno (ICM) del blastocisto. Poseen la capacidad de auto-renovarse indefinidamente en cultivo y de dar origen a células de las tres capas germinales, propiedad conocida como pluripotencia. En un trabajo anterior buscamos enzimas remodeladoras de la cromatina que fueran moduladas durante el proceso de diferenciación de ESC. Esta búsqueda arrojó una serie de genes candidato que podrían tener un rol en el mantenimiento de las propiedades básicas de las ESCs. En este trabajo estudiamos la relevancia de uno de estos genes, la metiltransferasa Prmt8. Utilizando un protocolo de diferenciación in vitro, comprobamos que Prmt8 se regula negativamente durante el proceso de diferenciación. Por otra parte, construimos una línea estable de mESCs que contiene en su genoma un shRNA inducible contra Prmt8. Probamos que al inducir este shRNA los niveles de mensajero de esta enzima disminuyen, y que esta disminución, en un principio, no afecta la capacidad de auto-renovación de las células. Mediante análisis de inmunofluorescencia estudiamos la presencia y localización de marcadores del estado indiferenciado. No encontramos diferencias sustanciales en los marcadores analizados al comparar las células cultivadas en presencia del inductor del shRNA con las células control. Por otro lado, diferenciamos la línea que sub-expresa Prmt8 y encontramos que los cuerpos embrioides evolucionan de manera diferente al control. Además, la pérdida de Prmt8 parece afectar el ciclo celular de ESCs, disminuyendo el número de células en fase S. Por último, utilizando un sistema heterólogo, analizamos si la expresión exógena de los factores de transcripción de pluripotencia modula la expresión de Prmt8. En conjunto los datos sugieren que Prmt8 es regulado positivamente por los estos factores de transcripción y modulado durante la diferenciación, hecho que podría ser clave en la determinación del tipo celular de destino.