La enzima TcATEL1 como posible sensor de hemo en Trypanosoma cruzi.

PUENTE, V; L. FRACCAROLI,; L. LAROCCA; LOMBARDO E; CARRILLO C

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2023

La enzima aminoacil-tRNA:proteína transferasa participa en el mecanismo de degradación de proteínas conocido como N-rule y ha sido reportada como sensor de los niveles de hemo intracelulares en diversos tipos celulares. Nuestro grupo identificó en el genoma de T. cruzi la secuencia TcCLB.506977.40 como candidata a codificar una aminoaciltRNA:proteína transferasa a la que llamamos TcATEL1; y confirmamos la presencia del gen (por PCR) y su expresión (por RT-PCR) en la cepa CL Brener (CLB). Dado que T. cruzi es auxótrofo para hemina, y ésta es vital para el parásito, evaluamos por RT-PCR semicuantitativa (usando el gen GAPDH como control) la expresión del gen TcATEL1 bajo diferentes condiciones de cultivo, como potencial mecanismo de sensado. Cuando los parásitos se cultivaron deprivados de hemina (hem) durante 120 hs (5 días), se observó un aumento del 200% de TcATEL1 a las 6 hs; y entre las 24 hs y 120 hs se mantuvo en 162,9%. A los 5 días de deprivación, se les agregó hemina en distintas concentraciones (0, 5, 10, 15 y 20 mg/L). Con el agregado de 10 mg de hem/L de medio, se recuperaron los niveles basales de TcATEL1 a partir de las 6 hs, mientras que con 5 y 15 mg de hem/L de medio, dicha condición se alcanzó a partir de las 48 hs; estos cultivos presentaron morfología y proliferación normal. Por otro lado, los cultivos con 0 o 20 mg/L mantuvieron elevados los niveles de expresión de TcATEL1; sin embargo, los parásitos a 20 mg/L presentaron una morfología y proliferación normal a diferencia de los cultivos a 0 mg/L que presentaron una morfología alterada y murieron luego del segundo repique. Estos resultados sugieren que la expresión de TcATEL1 podría modularse frente a cambios en la concentración de hemina en el medio de cultivo, funcionando como una proteína sensora de los niveles de hemo; y nos alientan a avanzar en los estudios para comprender la relación entre la modulación de TcATEL1 y el mecanismo de N-rule frente a la variación de hemo en T. cruzi.