Estudio de la participación de chaperonas moleculares en la producción in vitro de anticuerpos asimétricos inducida por sobrenadantes de cultivo placentario murinos

A. CIOCCHINI, S. MIRANDA, T. GENTILE, R. MARGNI

Buenos Aires, Argentina

Congreso; Congreso Nacional de Estudiantes de Bioquímica; 1999

Los mecanismos por los cuales el feto semialogeneico es protegido de los efectos citot6xicos del sistema inmune materno continua siendo uno de los problemas mas intrigantes del campo de la inmunología. Diversos trabajos realizados en nuestros laboratorios han demostrado que factores secretados por la placenta son capaces de aumentar la proporci6n de moléculas asimétricas sintetizadas por un hibridoma. Con el objeto de determinar el mecanismo de la acci6n glucosilante de los sobrenadantes de cultivo placentarios murinos (SP), nuestro prop6sito es analizar la participaci6n de proteínas denominadas chaperonas moleculares, relacionadas a procesos de glioosilaci6n y plegamiento intracelulares. Para ello SP obtenidos de la cruza AKR/J x AKR/J (n=3) de probado efecto glucosilante fueron adicionados a cultivos de hibridomas 11284 y 112D3, productores de mAGS anti-DNP simétricos y asimétricos, y cultivados durante 72 hs. La actividad anti-DNP y la proporci6n de moléculas IgG asimétricas en los sobrenadantes fue analizada empleando la técnica de ELISA antes y después de adsorber las moléculas glucosiladas por cromatografía de afinidad con Sepharosa-ConA. Las células fueron lisadas por sonicación. La presencia de hsp70 en el producto lítico obtenido fue investigada empleando la técnica de dot-blot utilizando mAG a-hsp72/73 + un sistema avidina-biotina especifico y revelado por quimioluminiscencia. Como control de inducción de hsp70 las células de hibridoma fueron sometidas a un estimulo térmico (42°C, 60min) y como control de revelado se empleó hsp70 comercial. Los resultados obtenidos mostraron que ambos hibridomas en ausencia de SP no expresan hsp70, mientras que los SP empleados han logrado inducir su síntesis. Puesto que las etapas de glicosilación de las proteínas de secreción se realizan en el retículo endoplásmico (RE), se analizarán análogamente la expresión de BIP, calnexina (CX) y calreticulina (CR), principales chaperonas de esta organela y la actividad de la UDP-glucosa glucosiltransferasa (GT), enzima reguladora de la actividad de CX y CR, en las células de hibridomas cultivados en presencia de SP.