Análisis de la expresión de HLA-G en células tumorales de coriocarcinoma humano bajo el efecto del cannabidiol (CBD) y de un extracto con alto contenido en CBD

MARTINEZ, KEVIN; PALMA, MARIA BELEN; SEPÚLVEDA, FEDERICO; CAROSELLA, EDGARDO; GARCÍA, MARCELA; RICCILLO, FERNANDO

La Plata

Congreso; 3° Congreso Argentino de cannabis y salud; 2024

INTRODUCCIÓN: El antígeno leucocitario humano G (HLA-G) es una proteína caracterizada por su expresión en las células trofoblásticas en la tolerancia inmune materno-fetal y de manera restringida en ciertos tejidos adultos sanos. Diversos tipos de cáncer activan su expresión, ya que el HLA-G les confiere la capacidad de evadir la respuesta inmune.Los cannabinoides han demostrado claramente tener un efecto paliativo en pacientes con diferentes tumores sometidos a tratamientos oncológicos convencionales. Sin embargo, su potencial terapéutico en oncología no se limita a dichos efectos. Numerosos estudios han demostrado sus efectos antitumorales en diversos modelos de tumores, tanto in vivo como in vitro.HIPÓTESIS: Alteraciones en la expresión de HLA-G estarían involucradas en la supervivencia de la línea tumoral de coriocarcinoma humano (JEG-3) por acción del CBD puro o en forma de extracto OBJETIVOS: Evaluar el efecto del cannabidiol (CBD) y de un extracto alto en CBD sobre la expresión de HLA-G en la línea tumoral JEG-3 mediante inmunocitoquímica (ICQ) y RT-qPCR, y comprobar la reversibilidad del probable efecto.MATERIALES Y MÉTODOS: Condiciones de cultivo: se cultivaron células tumorales JEG-3 durante 48 horas en presencia de CBD y extracto alto en CBD (20:1, CBD/THC), a concentraciones 0 y 5 µM en medio DMEM + DMSO 0,4%. Luego se quitaron los tratamientos y se cultivaron durante 36 hs. – RT-qPCR: Se aislaron y procesaron (extracción de ARNt y síntesis de ADNc) 600.000 a diferentes tiempos y mediante cebadores específicos se calcularon los niveles globales de ARNm para HLA-G. – ICQ: Las células se incubaron over-night con un Ac 1° monoclonal anti-HLA-G (Sta. Cruz Biotech-USA.) a una dilución de 1:50. Luego, las muestras fueron reveladas mediante el sistema ABC (Vector-USA) utilizando diaminobencidina como cromógeno. Los valores de área inmunomarcada (AI) se calcularon tomando como valor de referencia los obtenidos en la condición sin tratamiento (1,00).RESULTADOS: – ICQ: Los valores de AI calculados arrojaron un descenso significativo en ambos tratamientos: 0,51 ± 0.02 (CBD) y 0,3 ± 0.1 (extracto). – RT-qPCR: Luego de un descenso significativo en los niveles de ARNm en ambos tratamientos, dichos valores se revertieron a los niveles iniciales (pretratamiento) a las 36 hs de incubación sin CBD ni extracto. Todos los resultados fueron analizados por test-t p