Efecto del calcio y del litio sobre la longitud del cilio primario en células epiteliales renales LLC-PK1

PEREZ PL; SMOLER M; CANTERO MR; CANTIELLO HF

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS); 2015

El cilio primario (CP) es una organela históricamente considerada un apéndice vestigial de células eucariontes. Recientemente se han demostrado funciones sensoriales para el CP, cuya disfunción está asociada a enfermedades conocidas como ?ciliopatías?, como las poliquistosis renales autosómica dominantes y recesivas. Estudios previos indican que la policistina-2 (PC2), canal catiónico TRP no selectivo permeable al Ca2+, presente en el CP de células epiteliales renales, regula su función. En el presente estudio, investigamos el efecto de distintas maniobras que modificarían la función de la PC2 sobre la longitud del CP en células LLC-PK1. Estas células se mantuvieron en cultivo en medio DMEM suplementado con FBS (3%) a 37°C y atmósfera de CO2 hasta confluencia. Las placas fueron divididas en cuatro grupos, control (grupo 1) incubado en medio sin suplementos y grupos 2, 3 y 4 incubados en medio suplementado con CaCl2 (5 mM), LiCl (10 mM) o amiloride (200 μM) durante 18 hs, respectivamente. Posteriormente, se realizó inmunohistoquímica con marcación primaria de anticuerpo anti-tubulina acetilada (1:100) para la visualización del CP. Las células fueron observadas mediante microscopio invertido de fluorescencia (Olympus IX71), capturadas por video cámara (Hamamatsu Photonics) y procesadas a fines de cuantificar la longitud del CP. Las células del grupo 2, tratadas con CaCl2 mostraron una reducción del 45 ± 2.4% en el largo del CP respecto del control (p