EFECTO REGULADOR DEL CALCIO INTRACELULAR SOBRE LA ACTIVIDAD DE CANAL DE LA POLICISTINA-2

CANTERO MR, MONTALBETTI N, TIMPANARO GA Y CANTIELLO HF

Bernal, Buenos Aires

Taller; Taller de la Sociedad Argentina de Biofísica. Biofísica de macromoléculas: aspectos estructurales e iimplicancias biológicas y biotecnológicas; 2007

 El sinciciotrofoblasto humano (STh) actúa como barrera mediadora del pasaje de calcio (Ca2+) materno al feto, especialmente en el último trimestre de gestación. La PC2 es miembro de la superfamilia de los canales tipo TRP caracterizado por su actividad de canal catiónico no selectivo y permeable al Ca2+. La PC2 contribuye al transporte de Ca2+ en el STh. Basado en la homología con canales voltaje activables de Ca2+ y con otros miembros de la familia de los TRP, este canal podría ser también regulado por la concentración de Ca2+ intracelular.  Por esto, en el presente estudio investigamos, utilizando un sistema de reconstitución de membranas bilipídicas, el efecto de las concentraciones de Ca2+ en membranas apicales de STh y en la proteína aislada. La actividad control del canal se determinó en presencia de 10 a 15 µM de Ca2+ simétrico.  El quelado de Ca2+ intracelular con EGTA, dejando libre una concentración de 0,2 nM, redujo la actividad de dicho canal del STh en un 89%. Contrariamente, en la proteína aislada no se produjo efecto inhibidor, sugiriendo que dicho efecto podría ser mediado por proteínas acopladas. Una curva de titulación con agregados crecientes de Ca2+ intracelular luego del agregado de EGTA, permitió determinar una afinidad aparente para el sitio activador de Ca2+ de aproximadamente 5 nM. Paradójicamente, el agregado de Ca2+ extracelular tiene un efecto inhibidor, lo que previamente hemos postulado como mecanismo regulador de la actividad de la PC2. Los datos permitirían concluir que las concentraciones de Ca2+ intracelular normales mantienen una máxima activación por Ca2+ del canal. Estos datos también permiten postular la presencia de proteínas asociadas como blancos reguladores por Ca2+ de la actividad de canal de la PC2