PAPEL DEL CITOESQUELETO DE ACTINA SOBRE EL EFECTO DEL CALCIO INTRACELULAR EN LA ACTIVIDAD DE LA POLICISTINA-2

N MONTALBETTI, MR CANTERO, GA TIMPANARO Y HF CANTIELLO

Bernal, Buenos Aires

Taller; Taller de la Sociedad Argentina de Biofísica. “Biofísica de macromoléculas: aspectos estructurales e implicancias biológicas y biotecnológicas”; 2007

La policistina-2 (PC2) es un canal catiónico no selectivo perteneciente a la superfamilia de los TRP (TRPP2), que se expresa abundantemente en el sinciciotrofoblasto (STh) de la placenta humana a término. Estudios previos demostraron que en el STh, la PC2 es regulada por el citoesqueleto de actina. El transporte de Ca2+ a través del canal activa a la gelsolina. Nuestros trabajos previos fueron conducidos en condiciones de alto Ca2+ intracelular (10-15 mM), sin embargo la PC2 y/o proteínas asociadas requerirían bajas concentraciones de Ca2+ intracelular para activarse (ver Cantero en este simposio). Con el objetivo de  identificar los potenciales mediadores del efecto regulador del Ca2+ sobre la PC2, membranas apicales de STh fueron incorporadas en un sistema de reconstitución de bicapas. En condiciones control la reducción del Ca2+ por EGTA produjo un descenso del 89% en la corriente media.  El tratamiento de estas membranas con citocalasina D (CD, 16 mg/ml) a muy corto plazo (< 15 min) produjo un efecto similar. Tratamientos más prolongados con CD previos a la reconstitución evidenciaron un aumento de la actividad del canal ante el agregado de EGTA (2 y 16 hs de tratamiento). Para determinar potenciales elementos reguladores, la PC2 purificada por columna de afinidad fue reconstituída en condiciones similares. La proteína purificada por este medio se encuentra asociada con a-actinina. El agregado de EGTA a esta proteína produjo una inhibición en la actividad de la PC2 similar a la observada en STh. La reconstitución de la PC2 obtenida como producto de traslación in vitro, en cambio, no se inhibió en presencia de EGTA. Estos datos indican que el Ca2+ intracelular regula la función de PC2 a través de elementos del citoesqueleto, posiblemente sobre la a-actinina.