Estudio funcional del microRNA miR-71 en parásitos cestodos modelo

GRECCO, ANDRÉS; MACCHIAROLI, NATALIA; CUCHER, MARCELA; CECILIA ROSENZVIT, MARA

Buenos Aires

Simposio; XXI Simposio Mundo Sano; 2023

Mesocestoides vogae (syn.M.corti) es un parásito platelminto validado como modelo de laboratorio para el estudio de la clase Cestoda, la cual incluye especies como Echinococcus granulosus sensu lato que causan enfermedades tropicales desatendidas como la equinococosis quística o hidatidosis. Los microRNAs (miRNAs) son pequeños RNAs no codificantes. Su rol principal consiste en la regulación de la expresión génica a nivel post-transcripcional inhibiendo la expresión de mRNAs blanco mediante reconocimiento de sitios en sus 3’UTR. miR-71 es un miRNA altamente expresado en cestodos, ausente en vertebrados y con genes blanco esenciales para la biología parasitaria, por lo que representa un potencial blanco selectivo para el tratamiento de las cestodiasis. En trabajos previos de nuestro grupo se realizó el silenciamiento in vitro de miR-71 en cultivos celulares primarios de E. multilocularis. El objetivo de este trabajo es lograr el silenciamiento in vitro de miR-71 en parásitos completos en particular en tetratiridios (estadío larvario de M. vogae) e identificar sus genes blanco. Por último, se pretende analizar las posibles alteraciones en el desarrollo y en la capacidad de infección luego del silenciamiento de este miRNA. Para realizar el silenciamiento de miR-71 se utilizaron anti-miRs, los cuales son oligonucleótidos complementarios al miRNA de interés que bloquean su función. La expresión de miR-71 se cuantificó mediante RT-qPCR luego de la transfección con anti-miR-71 (9 µM). La predicción de genes blanco de miR-71 se realizó mediante los algoritmos miRanda y RNAhybrid y luego se realizó el análisis de sobreexpresión mediante RT-qPCR. Se evaluó a su vez el proceso de estrobilización tras el silenciamiento de miR-71 mediante inducción con taurocolato de sodio. Finalmente, se inocularon parásitos previamente silenciados por vía intraperitoneal en ratones BALB/c a fin de determinar alteraciones en la capacidad y el establecimiento de la infección. Mediante la administración de anti-miR-71 se logró el silenciamiento de miR-71 en un porcentaje de 64% respecto al grupo control. Entre los genes blanco sobreexpresados de miR-71 se encontraron factores de transcripción relacionados con procesos de desarrollo. En cuanto a los efectos fenotípicos, se observó una mayor tasa de estrobilización en cultivos transfectados con anti-miR-71. Respecto a la capacidad de infección, aquellos ratones inoculados con parásitos con miR-71 silenciado presentaron una masa parasitaria tres veces menor respecto a los grupos control al cabo de 17 días de infección. Estos resultados brindan conocimiento acerca de la función de los miRNAs en la biología de parásitos cestodos y sientan la base para el análisis de su potencial como blancos de drogas de enfermedades parasitarias desatendidas.