Extracto etanólico de Larrea divaricata para el control de Salmonella ser. Enteritidis y Salmonella ser. Typhimurium en cama de pollos y guano de gallinas

HOFFMANN, T.M.; SAMPIETRO, D.A.; BUENO, D.J.

Luján

Jornada; 2º Encuentro Interuniversitario de Avicultura; 2023

Universidad Nacional de Luján

Salmonella ser. Enteritidis (SE) y S. ser. Typhimurium (ST) son enterobacterias zoonóticas que pueden encontrase a lo largo de toda la cadena avícola. Entre las estrategias más importantes para el control de estos serovares se encuentran el empleo de antibióticos y desinfectantes. Sin embargo, el uso incorrecto de estas sustancias ha conducido a la selección de cepas bacterianas resistentes. Extractos vegetales y sus constituyentes bioactivos podrían contribuir al control de estos serovares, en especial de cepas multirresistentes. Los extractos de Larrea divaricata (LD), una especie nativa del noroeste argentino han demostrado tener efectos antimicrobianos sobre diversas especies fúngicas y bacterianas. Por ello, en este trabajo, se evaluó el efecto de un extracto etanólico de LD sobre el crecimiento de cepas de SE y ST, con distintos grados de resistencia a antimicrobianos, en cama y guano de aves, comparado con un desinfectante comercial. Se utilizó el método de microdilución para conocer la concentración inhibitoria mínima (CIM) del extracto sobre 2 cepas de SE y 2 cepas de ST aisladas de aves y ambientes avícolas, con diferentes grados de sensibilidad a antibióticos y desinfectantes. El valor de CIM de todas las cepas fue de 0,62 mg/ml de extracto. Se realizaron dos ensayos, el primero sobre cama de pollos estéril contaminada artificialmente con cepas de SE y ST y el segundo sobre guano de gallinas ponedoras contaminado naturalmente con ST. Para ambos ensayos se usaron dos dosis del extracto, 10 y 20 veces la CIM, suspendidas en agua estéril con 5% de dimetilsulfóxido. Para el primer ensayo la cama de pollos de engorde se esterilizó en autoclave a 121 °C durante 30 minutos y se fraccionó en bolsas estériles de 25 g cada una. Se utilizaron las dos cepas de cada serovar, cada una suspendida en solución fisiológica estéril en concentración de 1x104 UFC/ml. El ensayo consistió en cuatro tratamientos por cada cepa: control, cama estéril con la cepa; CIMx10, control + extracto LD en concentración 10 veces la CIM; CIMx20, control + extracto LD en concentración 20 veces la CIM; y DES, control + desinfectante Squad al 1% (dosis recomendada por el fabricante). Se realizó aislamiento y recuento de Salmonella spp. a las 3, 24 y 48 h de incubación a 25 °C. El aislamiento se realizó agregando 225 ml de agua peptona bufferada a cada bolsa. Este pre-enriquecimiento se incubó a 37°C durante 18-24 h y luego se sembró en agar semisólido modificado Rappaport Vasiliadis, que se incubó a 41°C por 18-24 h. Se sembraron placas de los medios selectivos agar xilosa lisina desoxicolato y agar Salmonella- Shigella. Se identificaron las cepas de Salmonella spp. usando pruebas bioquímicas. Para los recuentos se usó la técnica de la gota sembrando en agar tripteína de soja (ATS) y agar MacConkey (MC) para evaluar la viabilidad y la cantidad de células dañadas de SE y ST, respectivamente. Para el segundo ensayo se utilizó guano contaminado naturalmente con ST. Se fraccionó guano en bolsas estériles de 25 g cada una. Los tratamientos fueron: control, guano contaminado naturalmente con ST; CIMx10, control + extracto LD en concentración 10 veces la CIM; CIMx20, control + extracto LD en concentración 20 veces la CIM; y DES, control + desinfectante Squad al 1%. Se realizó aislamiento de Salmonella spp. y recuento aerobios totales y enterobacterias a las 3, 24 y 48 h de incubación a 25 °C. El aislamiento se llevó a cabo como se detalló anteriormente. Para el recuento se utilizó ATS y agar violeta rojo y bilis glucosa con el fin de evaluar la carga de aerobios totales y enterobacterias, respectivamente. Los tratamientos de ambos ensayos se realizaron por cuadriplicado. Las diferencias de las medias de los logaritmos de los recuentos se analizaron mediante el test de ANOVA. Todos los valores de significancia estadística fueron basados en un nivel de probabilidad de 0,05. En el ensayo de cama, para las cuatro cepas, ni extracto de LD ni el desinfectante disminuyeron la tasa de aislamiento de SE y ST. Con respecto al recuento, el efecto del extracto de LD y el desinfectante dependió de la cepa ensayada y de la dosis de LD a las 3 y 24h. Sin embargo, tanto el desinfectante como ambas concentraciones de extracto disminuyeron el recuento con respecto al control a las 48h. En cuanto a la supervivencia a través del tiempo de exposición para cada tratamiento, la cantidad de UFC disminuyó significativamente a las 24 y 48 h, tanto para el extracto de LD en ambas dosis como para el desinfectante. El recuento disminuyó a las 24 h en el control, pero se mantuvo igual a las 48 h. Por otro lado, el porcentaje de células dañadas fue mayor en los tratamientos con extracto de LD en ambas concentraciones y con el desinfectante con respecto al control. Se observó un incremento de células dañadas con tiempo de incubación en todos los tratamientos. En el ensayo de guano contaminado naturalmente, los tratamientos no difirieron entre sí en la tasa de aislamiento de Salmonella spp. ni en el recuento de aerobios. Con respecto a la carga de los mismos a través del tiempo de incubación, se observó una disminución a las 48 h sólo en el tratamiento con el desinfectante. En cuanto a la cantidad de enterobacterias, no se encontró diferencia significativa entre los tratamientos a las 3 y 24h. Sin embargo, el desinfectante y ambas concentraciones del extracto de LD mostraron una disminución significativa de estas bacterias con respecto al control a las 48 h. Asimismo, dentro de cada tratamiento, el recuento de enterobacterias fue menor a las 48 h, excepto en el control, en el que no se observó diferencia estadística entre los diferentes tiempos. Aun cuando no elimina SE y ST de cama de pollos y guano de gallinas ponedoras, el extracto de LD disminuye el recuento de las cepas ensayadas e incrementa el porcentaje de células dañadas en cama esterilizada contaminada artificialmente. Además, baja la carga de enterobacterias en guano con contaminación natural a las 48 horas, al igual que el desinfectante. Por lo tanto, este tipo de extractos puede ser una alternativa potencial para controlar SE y ST con diversos grados de resistencia a antimicrobianos presentes en cama y guano.