Actividad de la enzima lisil-oxidasa en el miocardio de bovinos con deficiencia secundaria de cobre.

GRECCO, ANDRÉS; POSTMA, GABRIELA CINTIA; NICASTRO, CAROLINA NATALIA; MINATEL, LEONARDO

Buenos Aires

Congreso; IX Jornadas Jovenes Investigadores; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La deficiencia de cobre (Cu) es una enfermedad que afecta a los rumiantes de prácticamente todas las zonas productivas de la Argentina. La carencia de este elemento en la dieta o la interferencia con otros elementos de la misma, como azufre (S) y molibdeno (Mo), ocasionan una deficiencia primaria o secundaria de Cu, respectivamente. Los signos clínicos de la enfermedad derivan de la importancia que tiene el Cu como cofactor de numerosas enzimas, entre ellas la lisil oxidasa (LOX), responsable del entrecruzamiento entre moléculas de elastina y colágeno. Un mayor depósito de tejido conectivo y un aumento en el espesor de las membranas basales del miocardio de bovinos con deficiencia de Cu fueron reportados por nuestro grupo de investigación y podrían sugerir una alteración en dicha enzima. El objetivo fue comprobar si el músculo cardíaco de bovinos con deficiencia de cobre inducida experimentalmente presentaba una alteración en la actividad de la enzima LOX. Para ello se utilizaron 18 muestras de miocardio obtenidas a partir de dos ensayos experimentales similares realizados en la Cátedra de Patología (FCV, UBA), el primero integrado por 10 bovinos Holando Argentino y el segundo por 8. En ambos ensayos se dividió a los animales en dos grupos (control y deficiente) según el peso y los niveles de Cu plasmáticos y hepáticos. El grupo control recibió una dieta con suficiente aporte de Cu, mientras que el grupo deficiente recibió una dieta con niveles elevados de Mo y S, desarrollando una deficiencia de Cu secundaria. Al momento de la eutanasia, los animales pertenecientes al grupo deficiente tenían 23,7 ± 6,2 µg/dl de Cu plasmático y 6,3 ± 1,1 µg/g MS de Cu hepático, mientras que los del grupo control tenían 67,9 ± 13 µg/dl y 182,6 ± 71,1 µg/g MS, respectivamente. Las muestras de miocardio del ventrículo derecho fueron congeladas en nitrógeno líquido y luego conservadas en freezer a -70ºC. La medición de la actividad enzimática de LOX fue realizada utilizando un kit comercial (AmpliteTM Fluorimetric Lysyl Oxidase Assay Kit, AAT Bioquest®, Inc.), según indicaciones del fabricante. Como control positivo, y con el fin de estimar la concentración de LOX “activa”, se utilizó LOX humana recombinante (Recombinant Human Lysil Oxidase Homolog 2/LOCL2, R&D SYSTEMS). Para la lectura de las placas de fluorescencia se utilizó un lector Varioskan™ LUX a 37°C durante 40 minutos. Cada muestra se midió por triplicado. El contenido de proteínas de cada muestra se determinó por el método de Lowry. Para el análisis estadístico se utilizó un test t de Student, con una confianza del 95%. El programa estadístico usado fue el Statistix 8.0. La concentración de LOX activa (estimada a partir de su actividad) en los animales del grupo deficiente fue de 0,97 ± 0,29 µg LOX/ mg proteína, mientras que en los animales del grupo control fue de 1,56 ± 0,60 µg LOX/ mg proteína, siendo esta diferencia estadísticamente significativa (p = 0,03). La disminución en la actividad de LOX en los animales con deficiencia de Cu podría impedir una adecuada remodelación de la matriz extracelular (MEC), aunque el tiempo de deficiencia transcurrido en los ensayos no fue suficiente para permitir que dichas alteraciones se manifiesten clínicamente. En roedores, la disminución de la actividad de LOX en los animales con deficiencia crónica de Cu culminó en alteraciones en la integridad del tejido conectivo, que resulta en un incremento en la cantidad de colágeno soluble. Se continuará con otros estudios acerca de la cuantificación del colágeno, sus subtipos y otros componentes relevantes de la MEC en el corazón de bovinos con deficiencia de Cu.