Composición histológica de las membranas basales del corazón de bovinos con deficiencia secundaria de cobre.

NICASTRO, CAROLINA NATALIA; POSTMA, GABRIELA CINTIA; GAZZANEO, PABLO; GRECCO, ANDRÉS; OLIVARES, ROBERTO; SCHAPIRA, ANDREA; MINATEL, LEONARDO

Congreso; IX Jornadas Jovenes Investigadores; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La deficiencia de cobre (Cu) o hipocuprosis es una de las deficiencias minerales más extendidas en nuestro país. La deficiencia secundaria de Cu es causada por su interacción con el molibdeno (Mo) y el azufre (S) de la dieta. El Cu juega un rol fundamental en el sistema cardiovascular, ya que es cofactor de varias enzimas, entre ellas la lisil oxidasa, que realiza los entrecruzamientos en las moléculas de elastina y colágeno. Nuestro grupo de investigación reportó un mayor depósito de tejido conectivo y un aumento en el espesor y fragmentación de las membranas basales (MB) del miocardio de bovinos con deficiencia secundaria de Cu. El objetivo fue estudiar si existían diferencias en las cantidades de colágeno tipo IV y laminina en las MB del corazón de bovinos con deficiencia secundaria de Cu. Se trabajó con muestras del ventrículo derecho de dos grupos (control y deficiente) de 9 novillos Holando Argentino cada uno, pertenecientes a dos ensayos similares de la Cátedra de Patología. Al momento de la eutanasia, los animales del grupo control tenían 67,9 ± 13 µg/dl de Cu plasmático y 182,6 ± 71,1 µg/g MS de Cu hepático, mientras que los del grupo deficiente tenían 23,7 ± 6,2 µg/dl y 6,3 ± 1,1 µg/g MS, respectivamente. Para la inmunomarcación del colágeno tipo IV se empleó un anticuerpo monoclonal anticolágeno IV, clon J3-2 (Sigma, USA), y para la inmunomarcación de la laminina se utilizó un anticuerpo policlonal antilaminina, clon ab11575 (Abcam, UK), producido en conejo. Se empleó un sistema revelador Cytoscan HRP detection system (Cell Marque, USA) y una solución de cromógeno DAB substrate kit (Cell Marque, USA). Como control positivo se utilizó riñón de bovino y como negativo se reemplazó el anticuerpo primario por solución salina buffer fosfato. Para la recuperación antigenética se utilizó olla a presión y buffer TrisEDTA (pH=8). Se tomaron fotografías a ciego (8 para colágeno tipo IV y 7 para la laminina) a 630X por cada animal, utilizando una cámara Leica ICC50 HD más un microscopio Leica DM750 y un sistema de captura de imágenes soft LAS V412 (Leica Co). El análisis se realizó mediante Image J. Para cuantificar la inmunomarcación del colágeno tipo IV se realizó sobre cada imagen una deconvolución de colores en el canal HDAB, obteniéndose 3 canales de colores (1, 2 y 3). Sobre el canal 2 se aplicaron diversos filtros y se seleccionó el área de interés, calculándose el área de marcación positiva con respecto al área total de la imagen. Dado que la inmunomarcación para laminina fue débil y fragmentada, se realizó una evaluación semicuantitativa basada en el porcentaje de marcación positiva con respecto a la superficie total de la imagen (score 1 ≤5%, score 2 >5-25%, score 3 >25-50% y score 4 >50%). Los datos obtenidos fueron comparados con Statistix 8.0, utilizando un test t de Student (colágeno tipo IV) y un test de Wilcoxon Rank Sum (laminina). La cuantificación de colágeno tipo IV fue de 7,33 % ± 2,40 % y de 8,25 % ± 2,71 % para los grupos control y deficiente, respectivamente (p = 0,4591). Tampoco se observaron diferencias significativas para la laminina (p = 0,5687). Se concluye que los animales deficientes no presentaron diferencias en la cantidad de colágeno tipo IV y laminina en las membranas basales del miocardio.